六味地黄丸、金匮肾气丸及健骨二仙丸含药血清对BMSCs成脂、成骨细胞分化相关基因的影响

目的 研究补肾方药对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs） 来源的前脂肪细胞向成骨分化的影响。方法 采用全骨髓贴壁法培养BMSCs，用经典化学方法诱导BMSCs为前脂肪细胞，用六味地黄丸、金匮肾气丸和健骨二仙丸含药血清（含量浓度均为10%，分别代表补肾阴、补肾阳和补肾填精方药），干预前脂肪细胞成骨分化过程；采用反转录－实时荧光定量PCR技术（RT real time qPCR），分别于第6、12和18天，检测成骨分化相关基因RUNX2、ALP、BGP、BMP2、BMP4、SPP1和IGF1 mRNA，及成脂分化相关基因LPL、FABP4和PPARγ mRNA表达水平。结果 对于成骨分化相关基因，与对照组比较，第6天各组基因表达无显著变化（2.0〉Ratio〉0.5）；第12天，金匮肾气丸组IGF1和RUNX2 mRNA表达升高较为显著，相对表达量（Ratio）分别为2.97和1.81；第18天，各组IGF1 mRNA表达均显著上升，六味地黄丸组、金匮肾气丸组和健骨二仙丸组Ratio值分别为3.74、12.60和8.35；各组SPP1 mRNA表达也显著升高，Ratio值分别为2.94、3.18和2.62。对于成脂分化相关基因，第6天，六味地黄丸组和金匮肾气丸组FABP4 mRNA表达显著下降（Ratio分别为0.47和0.40），其他基因表达均下调，但不显著；第12天和第18天，成脂分化基因表达变化均无显著变化（2.0〉Ratio〉0.5）。结论 成骨分化相关基因在补肾方药作用较晚时间出现表达上调的变化，而成脂分化相关基因在补肾方药作用较早时间即出现表达下调的改变，并且提示补肾阳法促进成骨分化、抑制成脂分化作用更为显著。