025 Sélection et évaluation de colorants vitaux afin d’améliorer le contrôle-qualité endothélial des greffons cornéens conservés

Introduction Le controle-qualite des greffons corneens necessite une determination precise de la Densite Cellulaire Endotheliale (DCE). Le denombrement des CE se fait actuellement par « dilatation osmotique » au NaCl 0,9 % donnant des resultats tres imparfaits. Notre objectif est de remplacer cette technique par une coloration vitale non toxique permettant de visualiser les CE aussi parfaitement qu’avec le Rouge Alizarine (RA), non utilisable car toxique mais servant de reference. Materiels et Methodes Apres recherche bibliographique, nous avons selectionne 30 colorants susceptibles de teinter les CE. Une paire de cornees animales de 3 especes differentes (porc, veau, lapin) a ete exposee pendant 1 minute avec une solution de l’un de ces trente colorants (solution commerciale ou dilution a 1 %, puis dilutions successives a 0,5, 0,1, 0,05, 0,01 %), puis observee au microscope a fond clair et en fluorescence. Les resultats ont ete compares aux resultats obtenus avec le RA et le type de coloration notee (bordures cellulaires, cytoplasmes, noyaux). Les colorants permettant un denombrement aussi precis que le RA ont fait l’objet d’un test de toxicite au Bromure de 3- (4–5 dimethylthiazol-2-yl)-diphenyl tetrazolium sur CE en culture. Resultats Six des 30 colorants se sont reveles interessants (Hemalun, Rose Bengale, Rouge Nucleaire, Rouge Congo, Bleu Evans et Chicago Sky Blue). Les colorants de la famille des diazoiques a tres faible concentration (Rouge Congo, Bleu Evans et Chicago Sky Blue) colorent le contour des CE aussi parfaitement que le RA et mettent en evidence les noyaux des cellules alterees. La toxicite de ces composes semble par ailleurs faible. Discussion Nos travaux suggerent que les colorants diazoiques pourraient avoir un interet majeur dans l’appreciation de la qualite des greffons corneens en donnant des indications morphologiques et fonctionnelles sur l’endothelium Conclusion L’evaluation des proprietes tinctoriales et de la toxicite de ces candidates colorants sur des cornees humaines scientifiques ex vivo est en cours ainsi que l’evaluation de la toxicite post greffe sur un modele animal avant d’envisager une evaluation en banque de cornee.