Regulatory effects of RhoGTPase on transition of liver sinusoidal capillarization: experiment with mice of schistosomal hepatic fibrosis

目的 探讨RhoGTP酶在肝窦内皮细胞转分化过程中的调控作用,及其对血吸虫病性鼠肝窦毛细血管化病变的影响和可能机制.方法 采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性肝纤维化模型,于13周吡喹酮顿服杀虫,14周追加hydroxyfasudil.13周时正常对照组(A组,10只)与血吸虫病组(B组,6只),16、19周和21周后(B组)、杀虫实验对照组(C组)、血吸虫病+hydroxyfasudil组(D组)、杀虫+hydroxyfasudil组(E组)各6只)剖腹取肝组织.分别作HE、Masson染色和透射电镜观察;免疫组化检测:p-膜联蛋白、CTGF、CD31、ColⅣ和LN;Western印迹检测:p-膜联蛋白、CTGF、RhoA、ColⅣ和LN蛋白表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测:CTGF、RhoA、ROCKⅡ mRNA水平.结果 与A组相比,动态观察B组肝组织RhoA、ROCKⅡ及CTGF mRNA表达水平明显上升,p-膜联蛋白、CTGF、RhoA、ColⅣ和LN蛋白表达量也增高.给予干预措施后,与C组及其它组相比,E组CTGF mRNA表达于16周显著下调,同时显示CTGF、LN、ColⅣ蛋白水平也降低.与B组相比,D组、E组p-膜联蛋白降低,16周时最为显著,但D组于19周开始p-膜联蛋白表达量渐恢复到原水平,其中E组明显低于D组.肝窦的超微结构观察,于21周时C组分别与B、D组相比,浸润的炎性细胞明显减少,Disse腔内胶原纤维有所减少,但肝窦内皮细胞窗孔、肝窦内皮下基底膜差异无统计学意义.E组与C组比较肝细胞器形态明显恢复,可见窗孔,未见基底膜.结论 RhoGTP酶在调控血吸虫病性鼠肝窦内皮细胞转分化过程中,通过上调CTGF和p-膜联蛋白发挥作用,抑制RhoGTP酶信号通路有可能为防治肝窦毛细血管化提供新的有效靶点。