Retinoblastoma 유전자 Transfection의 난소암세포주에서의 항종양작용

목적 : 종양억제 유전자로 알려지고 있는 RB 유전자와 N-terminal 112 아미노산을 제거한 RB94 단백질 유전자를 난소암 세포내로 도입하여 RB 단백질과 RB94 단백질 생산에 의한 steroid receptor 활성에 대한 RB 및 RB94 단백질의 난소암세포에 대한 항종양작용 즉, 세포증식 억제작용을 구명하고 향후 RB 종양억제 단백질에 의한 유전자요법의 토대를 만들고자 한다. 연구방법 : SKOV3와 NIHOVCAR3의 2가지의 난소암 세포주에 RB와 RB94를 transfection 시켜 생성되는 단백질이 steroid receptor의 활성도 및 세포성장에 미치는 영향을 살펴보았다. 결과 : 1. 난소암세포내 RB 와 RB94 단백질의 생산확인은 western blot을 시행하여 110 kd band의 RB 단백질과 94 kd band의 RB94 단백질을 확인하였다. 2. CAT assay를 이용한 RB 및 RB94 단백질의 steroid receptor에 대한 작용은 SKOV3 세포주와 NIHOVCAR3 세포주 모두에서 나타났으며 RB94에 의한 억제작용이 RB에 의한 억제작용보다 효과적이었고, SKOV3 세포에서보다 NIHOVCAR3 세포에서 효과적이었다. 3. 세포의 형태학적 변화를 현미경하에서 관찰한 결과 배양난소암세포에서 RB 및 RB94에 의한 작용으로 세포변화는 5일째부터 뚜렷한 세포수 감소의 차이가 관찰되었고 RB 단백질의 경우는 완만한 억제작용을 보였으며 RB94인 경우에는 급격한 억제작용을 나타냈다. 4. RB 및 RB94 단백질에 의한 SKOV3 및 NIHOVCAR3 난소암 세포의 proliferation 변화를 세포내 [3H] thymidine incorporation을 측정한 결과 RB94에 의한 억제작용이 RB에 의한 억제작용보다 효과적이었다. 결론 : 이상과 같은 연구 결과는 RB 유전자를 이용한 난소암 유전자치료의 가능성을 입증한 연구이다.