大肠杆菌β-内酰胺酶耐药基因bla_（TEM）,bla_（SHV）,bla_（CTX-M）三重PCR检测方法建立

本研究以我国大肠杆菌中常见的3种β-内酰胺酶耐药基因（bla,TEMblaSHV和blaCTX-M）作为目的基因,设计3对特异性引物,建立了blaTEM,blaSHV和blaCTX-M耐药基因三重PCR检测方法。三重PCR反应体系为：10×PCR缓冲液2.5μL,MgCl2（25mmol/L）2.5μL,dNTP（2.5mmol/L）4μL,blaTEM,blaSHV和blaCTX-M上下游引物（25μmol/L）分别为0.25μL、0.5μL、1.0μL,Taq DNA聚合酶（2.5U/μL）0.4μL,模板2.5μL,反应总体积为25μL。反应参数为：94℃5min,94℃50s,55℃55s,72℃1min,32个循环,72℃延伸5min。本方法的建立为大肠杆菌中β-内酰胺酶耐药基因的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段。