AIDS患者合并感染耶氏肺孢子虫的ITS1-5．8S rDNA-ITS2序列测定及基因型初步分析

目的测定AIDS患者痰液标本中耶氏肺孢子虫的ITS1-5．8S rDNA-ITS2序列并进行基因型分析。方法收集AIDS患者痰液标本，二硫苏糖醇（DTT）消化处理后进行六亚甲基四胺银（GMS）染色镜检；提取肺孢子虫DNA，巢式PCR扩增后进行测序，用Blast程序和DNAMAN软件对所测序列进行同源性检索和序列间比对，并和SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5．8SrDNA-ITS2序列进行比较分析。结果GMS染色法未检测到肺孢子虫，巢式PCR成功扩增出4例（31％），其ITS1-5．8SrDNA-ITS2基因序列长度为469bp，ITS1、5．8SrDNA、ITS2基因片段分别为146、158、165bp，与SD大鼠ITS1-5．8SrDNA-ITS2的基因同源性为86％（152／176），其中多为5．8SrDNA同源86％（136／158），ITS基因间未发现显著性同源；病例间耶氏肺孢子虫ITS1-5．8SrDNA—ITS2的基因同源性为98％-99％，其中5．8SrDNA高度保守，ITS1基因存在4个差异位点并具规律性，据此把耶氏肺孢子虫初步分为A型和B型；ITS2基因存在3个基因位点，但差异无规律性。结论成功从AIDS患者痰液标本中获取耶氏肺孢子虫ITS1-5．8SrDNA—ITS2基因序列，其和大鼠源基因差异明显，不同人源宿主耶氏肺孢子虫可存在不同基因型。