Expression of Dlx5 mRNA in neural stem cells (NSCs) from anterior subventricular zone (SVZa) and its effect on SVZa NSCs differentiating into neurons

目的 研究Dlx5 mRNA在培养的室管膜前下区(anterior subventriculor zone, SVZa)神经干细胞(NSCs)中的表达规律及其对SVZa NSCs方向分化的影响. 方法提取每一代培养的SVZa NSCs的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Dlx5及Er81 mRNA表达的情况;将重组质粒pEGFP-mDlx5用电穿孔的方法转染不表达Dlx5 mRNA代次的NSCs,再检测Dlx5 mRNA的表达情况,并将转染细胞分化后进行免疫荧光染色,分析基因转染细胞与神经元分化的关系;另外,还用100 ng/ml的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)处理不表达Dlx5 mRNA的NSCs,24 h后检测Dlx5 mRNA的表达情况.最后将不同Dlx5 mRNA表达情况的NSCs分化后用流式细胞仪检测神经元分化的比例. 结果细胞传代至第4代时Dlx5 mRNA表达消失,相应地,其神经元分化比例为(8.34±0.36)%,比表达Dlx5 mRNA的第3代NSCs的(19.16±0.75)%明显下降;用Dlx5基因转染该代 NSCs后,外源转染基因能够使内源性Dlx5 mRNA恢复表达,神经元分化比例也明显升高,为(35.66±0.58)%,免疫荧光染色也证实基因转染细胞分化成了神经元;而BMP-2处理也能诱导Dlx5 mRNA重新表达,神经元分化比例也有一定程度上升,与第3代NSCs的相似,为(22.27±0.12)%.除第3代NSCs分化组与BMP-2诱导组神经元分化比例差异无统计学意义外,其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P《0.05). 结论随着传代次数的增加,到第4代时,SVZa NSCs Dlx5 mRNA表达消失,而外源性Dlx5基因转染及BMP-2可以诱导其重新表达;Dlx5基因能使新生大鼠来源的SVZa NSCs向神经元方向分化。