人IL-12/慢病毒重组体对结肠癌干细胞“干性”的影响

目的：构建并鉴定人白介素12（Interleukin-12,IL-12）-慢病毒过表达重组体,观察其在结肠癌干细胞（Cancerstem cell,CSCs）中的表达及其作用,为后续动物试验做准备。方法：PCR扩增pORF-hIL-12质粒获得IL-12基因,通过双酶切及连接后构建IL-12/慢病毒过表达重组体;分离鉴定结肠CSCs,将IL-12/慢病毒过表达重组体转染结肠CSCs建立IL-12过表达模型,检测IL-12在结肠CSCs的表达及对结肠CSCs＂干性＂的影响。结果：PCR、酶切鉴定及测序证实IL-12/慢病毒过表达重组体构建正确,流式细胞仪成功分选出CD133＋CD44＋SW480结肠CSCs,IL-12/慢病毒转染结肠CSCs后,RT-PCR及West-ern blot证实结肠CSCs培养上清均有IL-12表达,IL-12抑制结肠CSCs自我更新,促进其分化。结论：IL-12/慢病毒过表达重组体能在结肠CSCs中稳定表达并能抑制结肠CSCs自我更新及分化。