Voltammetric studies on the interaction of orange G with proteins: analytical applications

A interacao do alaranjado G com proteina foi investigada pela tecnica de voltametria. O alaranjado G, em solucao tampao Britton-Robinson (B-R), pH 2,0, mostrou um pico voltametrico irreversivel de reducao, a -0,17V (vs. SCE) utilizando mercurio como eletrodo de trabalho. A adicao de albumina de soro humano (HSA) a solucao de alaranjado G, resultou no decrescimo do pico de corrente de reducao, aparentemente sem variacoes dos portenciais de pico e sem o surgimento de novos picos de corrente. Os parâmetros eletroquimicos da solucao de alaranjado G, na ausencia e presenca de HSA, foram calculados e comparados. Os resultados mostraram que nao ocorreram variacoes significantes, indicando que o comportamento eletroquimico da solucao reacional utilizando mercurio como eletrodo de trabalho nao variou e que foi formado um biocomplexo supramolecular, eletroquimicamente inativo. O mecanismo de interacao foi devido a formacao do campo microeletrostatico na estrutura da albumina em solucao aquosa, causando a interacao com o alaranjado G, o que induziu o decrescimo da concentracao de equilibrio do alaranjado G na solucao reacional, e o decrescimo do pico de corrente de reducao. As condicoes de interacao foram discutidas cuidadosamente. Sob condicoes otimas, o decrescimo do pico de corrente foi proporcional a concentracao da proteina e posteriormente, usado para a determinacao de diferentes tipos de proteinas. As curvas de calibracao para a determinacao de HSA, albumina de soro bovino (BSA), ovalbumina (OVA), hemoglobina bovina (BHb) e lipase, foram lineares nos intervalos de 4,0~28,0 mg L-1, 4,0~30,0 mg L-1, 2,0~20,0 mg L-1, 2,0~25,0 mg L-1 e 2,0~30,0 mg L-1, respectivamente. O limite de deteccao foi 3,0 mg L-1 para HSA, 3,5 mg L-1 para BSA, 1,0 mg L-1 para OVA, BHb e lipase. O novo metodo eletroquimico estabelecido foi aplicado para determinar o teor de albumina em amostras de soro humano sadio e os resultados apresentaram boa concordância com o tradicional metodo espectrofotometrico Coomassie Brilliant Blue (GBB G-250).