角蛋白酶基因 gm2886 在密旋链霉菌ACT12中的表达及鉴定

通过生物信息学分析，在本实验室分离得到的1株羽毛高效降解菌微白黄链霉菌Fea-10基因组中发现基因 gm2886 (GenBank Accession Number: KY368946)可能编码一新的角蛋白酶，通过在该基因5'端和3'端分别连接 红霉素抗性 基因 启动子 ( PermE )和组氨酸标签编码序列并构建在大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pSET152上，接合转入密旋链霉菌 Streptomyces pactum ACT12，从而实现了异源表达，蛋白纯化后对其酶学性质进行了研究。实验结果表明，带有组氨酸标签编码序列的 gm2886 在密旋链霉菌ACT12中可以表达分泌得到1个大小约为36 kDa的蛋白。多种底物检测表明异源表达得到的重组蛋白GM2886-His6具有蛋白酶活性，可以降解水不溶性的天青角蛋白和羽毛粉；其最适温度和pH分别为50 ℃和pH 10.0。PMSF可抑制GM2886-His6的酶活，而EDTA不能，说明该酶为丝氨酸蛋白酶。本研究为从分子水平上解析羽毛高效降解菌Fea-10的活性机理，从而进一步开发其应用潜力提供了基础，同时可为该类蛋白酶的研究提供借鉴。