地芽孢杆菌Geobacillus sp.GXS1α-淀粉酶的饱和突变及酶学性质研究

采用半理性设计方法，在网站Geno3D 上以PDB 数据库中B. stearothermophilus 麦芽糖淀粉酶（BSMA） 的三维结构为模板，对AMY（α-淀粉酶）进行三维结构同源建模（二者氨基酸的同源性为33％）。比较同源建模预测的3D 结构和模板BSMA 的3D 结构关键位点，在此基础上通过计算机辅助设计软件ProSa2003， 根据能量变化确定了AMY 三个饱和突变位点：D192 、E221 和D289 。利用兼并引物对AMY 的假定活性中心位点D192 、E221 和D289 的氨基酸分别进行饱和突变，定点（饱和）突变库筛选得到4 个有活力的突变子D192A 、E221N 、E221L 和D289L， 并对突变酶的酶学性质进行初步研究。