SUPLEMENTAÇÃO DE MEIO DE CULTIVO DE EMBRIÕES COM MODULADORES DA ACIL-COA SINTETASE DE CADEIA LONGA

As Acil-CoA sintetases de cadeia longa (ACS) sao uma familia de enzimas que ativam acidos graxos de cadeia longa para gerar Acil-Coa de cadeia longa, substrato essencial para sintese de varias especies lipidicas, incluindo triacilglicerol, colesterol e fosfolipidios. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da modulacao da ACS no desenvolvimento e criopreservacao de embrioes bovinos. Oocitos recuperados de ovarios de abatedouros contendo citoplasma homogeneo e mais de tres camadas de celulas do cumulos foram maturados (dia -1) e fertilizados (dia 0) in vitro. Os possiveis zigotos foram cultivados em aaSOF contendo 2,5% de soro fetal bovino (SFB). No dia 4 de cultivo, o meio foi suplementado com o modulador positivo (ACS+) e negativo (ACS-) da ACS. Um estudo preliminar (1000 oocitos) foi conduzido para determinar a melhor dose das drogas entre 5 concentracoes (100x, 10x, 1x, 10-1x e 10-2x). A maior dose de cada modulador que nao afetou o desenvolvimento e a qualidade embrionaria foi selecionada (ACS+: 10x e ACS-: 10-2x). Posteriormente, 3369 oocitos foram maturados, fertilizados e cultivados in vitro (aaSOF + 2,5% SFB). No dia 3, foram avaliadas as clivagens e os embrioes nao clivados foram descartados. No dia 4, os embrioes foram aleatoriamente distribuidos para cada tratamento a seguir: ACS+ (n=579), ACS- (n=594), associacao ACS+ e ACS- (ACS+/-; n=581), e controle (C; tratado apenas com PBS, n=600). No dia 7, a producao de blastocistos foi avaliada e blastocistos expandidos de grau I, II e III foram vitrificados (n=293) pelo metodo cryotop. Os dados foram analisados por ANOVA utilizando o PROC GLIMMIX do SAS. A taxa de clivagem total foi de 71,2% (2921/4105). A producao de blastocistos foi similar (P>0.05) entre tratamentos: ACS+ (24%; 199/829), ACS- (24% 198/131), ACS+/- (23%; 190/815), C (27%; 221/826). Nao houve diferenca (P>0.05) na taxa de re-expansao entre os tratamentos e grau de qualidade dos blastocistos (ACS+: 91-100%; ACS-: 90-100%; ACS+/-: 91-95%; e C: 86-96%). A taxa de eclosao dos embrioes expandidos grau I (ACS+: 93.3%, 14/15; ACS-: 83.8%, 26/31; ACS+/-: 86.9%, 20/23; e C: 96.7%, 30/31) e grau II (ACS+: 91.3 %, 21/23; ACS-: 92.3%, 12/13; ACS+/-: 65.2%, 15/23; e C: 84.0%, 21/25) foram similares (P>0.05) entre tratamentos. Contudo, blastocistos expandidos grau III derivados de ACS+ (78,2 %, 18/23) tiveram maior (P 0,05) com a ACS +/- (58,6%, 17/29). Portanto, este estudo revela que: i) o uso de moduladores positivos e negativos da ACS nao afetou o desenvolvimento embrionario; ii) a modulacao negativa da ACS nao melhorou a criotolerância; iii) a estimulacao da ACS aumentou a criotolerância de blastocistos expandidos grau III, mesmo em associacao com o modulador negativo. Assim, acredita-se que a ativacao de acidos graxos contendo 12, 14 e 20 carbonos no metabolismo lipidico favorece a criotolerância de embrioes de qualidade inferior.