Bendamustin ile indüklenen HL60 hücre serisinde apoptozun ve hücre döngüsünde görevli genlerin ekspresyon değişimlerinin belirlenmesi

Amac: Akut miyeloid losemi (AML), hematopoetik oncul hucrelerin heterojen klonal bir hastaligidir. Akut promiyelositer losemi (APL), bir AML alt tipidir ve morfolojik olarak anormal promiyelositler ile karakterize edilir. APL’de gorulen en belirgin kromozom duzensizligi ise 15. kromozomdaki promyelositik losemi (PML) geni ile 17. kromozomdaki retinoik asit reseptor (RAR) alfa geninin translokasyonu sonucu bir fuzyon proteini olusturmasidir. Bendamustin suda cozunebilen, beyaz, nitrojen hardal grubu ve butirik asit yan zinciri bulundurmasi nedeniyle amfoterik ozellik ozellik gosteren mikrokristallin tozudur. Alkilleyici ajan olan bendamustin ayni zamanda purin analogu ozelligi gosterir ve diger alkilleyici ajanlara gore toksisite profili daha ilimlidir. Bu calismada, bendamustinin APL hucre serisi olan HL60 hucreleri uzerindeki sitotoksik, sitostatik ve apoptotik etkileri incelenmis ve hucre dongusu, mitotik katastrof ve apoptoz ile iliskili genlerinin ilac ile muamele sonrasindaki ekspresyon degisimleri belirlenmistir. Gerec ve Yontem: Calismamizda bendamustinin APL’ye model olusturan HL60 hucreleri uzerindeki sitotoksik etkisini WST-1 testi ile, apoptotik etkisini Annexin V ve Apo Direct Tunnel methoduyla, sitostatik etkisini ise Cycletest Plus DNA Reagent Kit ile degerlendirilmistir. Ayrica bendamustinin HL60 huce serilerindeki hucre dongusu, mitotik katastrof ve apoptoz ile iliskili genlerinin mRNA ekspresyonlarina etkisi kantitatif RT-PCR ile rolatif olarak belirlenmistir. Bulgular: Bendamustinin sitotoksik etkisinin HL60 hucre serisi uzerinde yuksek dozlarda etkili oldugu belirlenmistir. Bununla birlikte, apoptotik etkisinin her iki yontem ile de doza bagimli olarak anlamli bir sekilde arttigi belirlenmistir. Bendamustin ile 48 saat muamele sonrasinda HL-60 hucrelerinde apoptoz ile iliskili oldugu bilinen CASP3, CASP8, CASP9 ekspresyonlarini sirasiyla 2.4 , 5.7, 6.8 – kat arttirdigi saptanmistir. Ayrica mitotik katastrofi ile iliskili oldugu bilinen Plk1 ekspresyonun 2.5-kat azaldigini ve tumor supresor oldugu bilinen Plk2 ekspresyonunda ise 17 katlik bir artma belirlenmistir. Sonuc : Bulgularimiz, bendamustinin apoptoz ve mitotik katastrof gibi hucre olum mekanizmalari uzerinde etkili oldugunu ve APL’ nin tamamlayici tedavisinde alternatif bir tedavi olarak kullanilabilecegini gostermektedir.