人锌转运蛋白8的HLA-A~＊0201限制性CTL表位的预测及初步验证

目的预测和初步鉴定1型糖尿病（T1DM）主要自身抗原锌转运蛋白8（ZnT8）的HLA-A＊0201限制性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTL）表位,为基于ZnT8抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS预测工具预测该抗原HLA-A＊0201限制性结合肽,人工合成待测表位肽,利用T2细胞株测定各肽与HLA-A＊0201分子的结合力。利用酶联免疫斑点检测（enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT）方法检测候选肽刺激T1DM患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-2的能力,利用标准51Cr释放试验检测特异性CTL诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,ZnT8（107-115）、ZnT8（115-123）及ZnT8（145-153）与HLA-A＊0201分子具有较高的结合荧光强度,可在体外有效诱导抗原特异性CTL的产生,刺激T1DM患者PBMC分泌IFN-γ和IL-2,并对抗原肽负载的T2细胞具有明显的杀伤效应。结论 ZnT8（107-115）、ZnT8（115-123）及ZnT8（145-153）可能是HLA-A＊0201限制性CTL表位,为基于人ZnT8抗原表位的特异性免疫治疗奠定理论基础。