Balb／Cdx鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达

目的获取具有生物学活性的Balb／C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素（MBL-A）糖识别域（CRD）蛋白。方法应用PCR从含Balb／C小鼠MBL-A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的基因片段，将其克隆至原核表达载体pET41a（＋）．在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达目的蛋白。表达产物（包涵体）经洗涤和复性处理后，利用GST柱纯化，以SDS-PAGE、Western blotting和ELISA进行分析鉴定。结果从pmMBL-A中扩增到约450bp的DNA片段．构建重组载体pET41a—mMBL-A-CRD，经酶切和测序鉴定后，将其导人大肠杆菌BL21（DE3）中表达，表达产物主要以包涵体形式存在，其相对分子质量约47000。包涵体经洗涤及复性处理，GST柱纯化后，融合蛋白的纯度达90％以上。Western blotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应，糖结合试验表明表达产物具有生物学活性。结论成功获得了具有生物学活性的Balb／C小鼠MBL-A CRD蛋白，为MBL-A分子的研究奠定了一定基础。