Expression of agrin gene in the primary culture of skeletal myoblasts

目的 研究神经源性聚集蛋白(agrin)基因在原代培养成肌细胞中的表达.方法原代培养成年大鼠的成肌细胞,免疫细胞化学方法进行鉴定,将agrin-Y4Z8基因cDNA片段亚克隆入pCDNA3真核表达载体,重组子经脂质体介导转染成肌细胞,G418筛选,获得具有抗性的克隆,增殖后以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光的方法检测基因的转录和蛋白表达,并初步测定其生物学活性.结果原代培养8周后,90%以上仍为成肌细胞,转染神经源性agrin基因后,成肌细胞可以表达相应的mRNA和有功能活性的蛋白.结论原代培养的成肌细胞可以作为agrin基因转移的有效载体,可用于进一步肌肉功能减退的基因治疗中。