Perfil transcriptómico y proteómico de las vesículas extracelulares de orina: diferencias entre donante renal y paciente trasplantado normo-funcional

El trasplante renal (TR) es la mejor aproximacion terapeutica para la enfermedad renal cronica (ERC) en estado terminal. Sin embargo, en la practica clinica, la monitorizacion de la funcion renal se realiza, principalmente, mediante metodos indirectos. Respecto a los metodos directos, la biopsia renal (BR) es el metodo de referencia en el diagnostico de la mayoria de patologias renales, incluyendo la disfuncion del injerto renal. No obstante, esta tecnica es invasiva, de limitada repetitividad y, a menudo, describe un dano ya irreversible. En cambio, la orina es un biofluido de facil acceso y, practicamente, de nula invasividad. Por lo tanto, la informacion contenida en este fluido, y en concreto en las vesiculas extracelulares de orina (oVEs), es una potencial fuente de nuevos biomarcadores de patologia renal. Actualmente existen diversos metodos de aislamiento de oVEs, aunque la mayoria de ellos obtienen una mezcla compleja de proteinas, lipoproteinas y restos celulares que podrian enmascarar biomarcadores relevantes. Por este motivo, el primer objetivo de la presente tesis es evaluar la cromatografia de exclusion por tamano (SEC) como metodo de aislamiento de oVEs. Nuestros resultados demuestran que la ultrafiltracion de la orina seguida de SEC es una opcion adecuada para aislar oVEs, ya que reduce considerablemente la presencia de contaminantes solubles. Esta metodologia permite un analisis mas preciso de los biomarcadores asociados a oVEs mediante las aproximaciones omicas. El segundo objetivo de la presente tesis es caracterizar el perfil de las oVEs de donantes vivos (DV) y donantes cadaver (DC), y compararlo con pacientes trasplantados normo-funcionales (FRN), con el fin de averiguar si la terapia farmacologica afecta al rinon y, en consecuencia, a la composicion de las oVEs. Los resultados de secuenciacion masiva mostraron que el miR-326 estaba significativamente sobrerrepresentado en DV, mientras que el miR-7706 solamente se detecto en FRN. Estos miRNAs se relacionan con la apoptosis y la supervivencia celular, respectivamente. Por otra parte, se identificaron 70 proteinas sobre-expresadas en los DV respecto a los FRN. La mayoria de estas proteinas estaban relacionadas con el metabolismo celular. Estas diferencias pueden ser debidas al tratamiento inmunosupresor de los FRN. En resumen, en este estudio piloto hemos descrito que el perfil transcriptomico y proteomico de los DV, DC y FRN es diferente, aunque estas diferencias parecen no tener un impacto significativo en la funcion del injerto a corto plazo (1 ano). En general, los resultados y el perfil diferencial de proteinas y miRNAs entre los donantes de organos y los FRN sugieren que en futuros estudios comparativos en pacientes post-TR, las oVEs del paciente FRN son el grupo control apropiado en lugar de las oVEs de los donantes. Finalmente, hemos analizado el patron de glicosilacion de las oVEs entre donantes y pacientes post-TR con disfuncion del injerto. Que sepamos, esta es la primera descripcion de la presencia de fucosas en las oVEs. Adicionalmente, hemos descrito algunas diferencias en los ensayos de union a lectinas entre donantes y pacientes. Estos hallazgos deben ser confirmados en futuros estudios.