Modulación de la abundancia de acuaporinas 2 en el riñón de la rata: efecto del óxido nítrico durante el estado hipovolémico

Hemos demostrado que el shock hemorragico induce un incremento en la actividad de la enzima oxido nitrico sintetasa, isoforma especifica y dependiente del tiempo. Dicha activacion estaria involucrada en la modulacion de la funcion cardiovascular. Pareceria que la inhibicion del sistema del oxido nitrico previene el aumento de la frecuencia cardiaca que se observa en las fases tardias del estado hipovolemico inducido por una perdida aguda de sangre. En este estudio planteamos la hipotesis de que la inhibicion del sistema del oxido nitrico altera la expresion y/o la localizacion de las acuaporinas 2 en los tubulos colectores renales de ratas sometidas a una hemorragia. Se utilizaron ratas Sprague-Dawley macho, divididas en cuatro grupos (n =15 por grupo): a) normotensas (grupo N), b) hipovolemicas (hemorragia 20% volemia) (grupo H), c) normotensas y tratadas con N G-nitro-L-arginina metil ester (grupo L-NAME N) y d) hipovolemicas y tratadas con el inhibidor (grupo LNAME H). La distribucion y la expresion de las acuaporinas 2 se determinaron mediante analisis inmunohistoquimico y Western blot a los 120 minutos del sangrado. La hemorragia indujo un incremento en la expresion de las acuaporinas 2 a los 120 minutos del sangrado. La inmunolocalizacion mostro que las acuaporinas 2 se ubicaron en el citoplasma de las celulas principales de los tubulos colectores renales de las ratas sometidas a hemorragia. La inhibicion del oxido nitrico aumento los niveles de acuaporinas 2, principalmente en la membrana apical. Se demuestra asi que el sistema del oxido nitrico estaria asociado con una disminucion progresiva de la expresion de las acuaporinas 2 que contribuye a la alteracion de la capacidad de concentracion de la orina en respuesta al shock hemorragico. We have previously demonstrated that hemorrhagic shock induces a time-dependent increase in the activity of nitric oxide synthase specific isoform. Such activation might be involved in modulation of cardiovascular function. It seems that the inhibition of the nitric oxide system prevents hemorrhage- induced heart rate changes seen in late stages of hypovolemic shock. The objective of this study was to assess if the inhibition of the nitric oxide system alters aquaporin-2 expression and/or location in the collecting-duct systems in kidneys of bleeding rats. Male Sprague-Dawley rats were used, divided in four groups (n = 15 for each group): a) normotensive rats (group N), b) hypovolemic rats (animals subjected to a 20% loss of the total volemia) (group H), c) normotensive rats pretreated with the nitric oxide synthase inhibitor N G-nitro-L-arginine- methyl ester (group L-NAME N), and d) hypovolemic rats pretreated with the inhibitor (group L-NAME H). The distribution and the expression of aquaporin-2 were assessed 120 minutes after bleeding by immunohystochemical and Western blot analysis. An increase in aquaporin-2 expression was seen 120 after blood loss. Immunolocation showed aquaporin-2 inside the cytoplasm of collecting-duct main cells in kidneys of bleeding rats. Nitric oxide inhibition increased aquaporin-2 levels, especially in the apical membrane. Thus, the nitric oxide system might be associated with a progressive decrease in the expression of aquaporin-2 which may alter urine concentration as a response to hemorrhagic shock.