海带磷酸甘露糖变位酶（PMM）基因的克隆与表达分析

磷酸甘露糖变位酶（PMM）是褐藻胶和岩藻聚糖合成过程中的关键酶之一。本研究利用c DNA末端快速克隆（RACE）技术,获得2条海带PMM基因（Sjpmm1,Sjpmm2）序列。其中,Sjpmm1的开放阅读框（ORF）长759 bp,其编码的Sj PMM1为卤酸脱卤酶（HAD）超家族成员,含252个氨基酸,分子量约为28.51 kDa;而Sjpmm2的ORF长1866 bp,其编码的Sj PMM2属于磷酸己糖变位酶超家族的成员,含621个氨基酸,分子量约为66.49 k Da。海带PMM的二级结构均以？-螺旋为主。进化分析表明,Sjpmm1来自于原始真核生物,而Sjpmm2来源于质体的第一次内共生作用。实时定量PCR分析发现,海带受到高温或低温胁迫时,Sjpmm1和Sjpmm2转录水平上升,以合成岩藻聚糖抵抗环境影响。此外,利用p MAL-c5X载体对Sj PMM1进行体外表达,得到高浓度的可溶性融合蛋白,为后续的Sj PMM功能分析提供基础。