双链RNA饲喂干扰家蝇 CYP6D1 基因表达方法的建立

目的利用饲喂双链RNA（dsRNA）对家蝇拟除虫菊酯抗性相关基因CYP6D1的表达进行干扰，并对干扰效果进行评价。 方法化学合成家蝇CYP6D1基因，连接入载体质粒L4440，转化入大肠埃希菌DH5α扩增质粒。抽提质粒，将其转化到大肠埃希菌HT115（DE3），并在异丙基-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下表达CYP6D1基因的dsRNA。将含有CYP6D1基因dsRNA的HT115（DE3）饲喂家蝇，72 h后通过荧光相对定量技术评价家蝇体内CYP6D1基因的表达变化。未进行质粒L4440转化的大肠埃希菌菌株HT115（DE3）饲喂家蝇作为对照。 结果/结论采用2-△△Ct法对对照组和处理组的mRNA相对表达量进行定量。目的基因和内参基因标准曲线R2值均> 0.99，扩增效率M值均在0.90~1.10之间。与对照组相比，处理组CYP6D1基因mRNA相对表达量下降了40.1%，两者之间差异有统计学意义（t=-11.377，P=0.008）。 结论初步建立了饲喂dsRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因CYP6D1表达进行干扰的方法，在mRNA水平上实现基因表达干扰效果。