鸡蛋主要过敏原Gal d1片段基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因并检验其免疫活性。方法:提取鸡蛋的总RNA,采用RT- PCR方法扩增出目的基因片段,将其克隆入T载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT- PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中进行诱导表达。通过Ni~(2+)亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE结合活性。结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3。基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化,用Western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性。