金鱼 Tgf2 转座酶的原核表达及其DNA结合活性

金鱼 Tgf2 转座子基因属于 Hobo/Activator/Tam3（hAT） 超家族，其编码的活性转座酶能在多种鱼类转座中介导基因插入及诱变，因此在鱼类重要性状主控基因的筛选、功能解释及育种等方面具有重要的应用前景。鉴于 Tgf2 转座酶基因（JN886591）存在众多稀有密码子，本研究依据大肠杆菌对密码子的偏好性，对金鱼 Tgf2 转座酶基因进行密码子优化，所得 Tgf2 转座酶基因连接原核表达载体pET-28a（+），将重组载体转化到大肠杆菌BL21（DE3）细胞。该大肠杆菌细胞在培养温度37℃、OD 600 ≈0.5时用IPTG诱导获得高效表达，即菌体中含有8.8%的重组蛋白，上清液中含有4.0%重组蛋白。采用亲和层析纯化从菌体上清液中分离得到分子量约70 ku的可溶性重组蛋白，经MALDI-（TOF）/TOF串联质谱鉴定其为重组 Tgf2 转座酶。进而采用分子排阻色谱法研究转座酶的DNA结合活性，结果表明：所得重组 Tgf2 转座酶能识别并结合含 Tgf2 转座子特异性亚末端重复序列的DNA探针，即启动转座。采用原核表达体系高效获得重组 Tgf2 转座酶，为其作为工具酶应用于鱼类生物学研究奠定必要的基础。