Procédé pour le mesurage parallèle des variations génétiques

La presente invention concerne la determination de l'identite d'un nucleotide a etudier dans une molecule d'acide nucleique cible par combinaison de la cible avec deux amorces. On immobilise la premiere amorce sur un substrat, et elle s'hybride avec et se developpe depuis un emplacement 3' du nucleotide a etudier dans la cible, de facon a incorporer le complement du nucleotide a etudier dans un premier produit d'extension. La seconde amorce s'hybride alors avec et se developpe sur la base du premier produit d'extension, qui est immobilise sur le substrat via la premiere amorce, en un emplacement 3' du complement du nucleotide a etudier, de facon a incorporer le nucleotide a etudier dans un second produit d'extension. Le second produit d'extension se dissocie alors du premier produit d'extension, et donc du substrat, et se re-hybride avec une autre molecule d'amorce qui ne s'est pas developpee. La premiere amorce non developpee se developpe alors depuis un emplacement 3' du nucleotide a etudier dans le second produit d'extension, de facon a former, par combinaison avec le second produit d'extension, un fragment d'acide nucleique a double brin. Les deux amorces sont concues pour incorporer une partie de la sequence de reconnaissance d'une endonuclease de restriction (RE) qui reconnait une sequence nucleotide partiellement variable interrompue, en l'occurrence une sequence sous la forme D-N-S ou D et S designent des sequences de nucleotides specifiques essentielles pour la reconnaissance de la RE, et N est une sequence constituee de n nucleotides viables egalement necessaires a la reconnaissance de la RE. La premiere amorce incorpore la sequence D, la seconde amorce incorpore la sequence S, et elles sont concues, dans la perspective de la cible, de facon a produire un fragment d'acide nucleique ou les sequences constantes D et S sont separees par la sequence variable N, ou le nucleotide a etudier se trouve dans la region N. L'action de la RE sur le fragment d'acide nucleique fournit un petit fragment d'acide nucleique qui se prete a la caracterisation, de facon a reveler l'identite du nucleotide a etudier.