人超氧化物歧化酶（SOD）基因的原核表达与蛋白纯化

从人直肠癌细胞株Colo320中提取总RNA，经RT-PCR扩增出SOD基因片段，经限制性内切酶（BamHI，Sinai）酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上，重组质粒转化大肠杆菌，经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认，证实成功地构建了人SOD基因融合表达载体．转化菌经IPTG诱导表达，SDS-PAGE显示有与预期大小约44kD相吻合的融合蛋白带，获得了可溶性表达的目的蛋白，采用Glutathione Sepha—rose4B亲和层析对重组蛋白进行纯化，获得了纯度很高的目的蛋白．