Estudio funcional de variantes en el gen GLA: implicación en la heterogeneidad clínica de la enfermedad de Fabry y en su tratamiento

La enfermedad de Fabry (EF) es una alteracion de acumulo lisosomal producida por una deficiencia de la enzima lisosomal ?-galactosidasa A. Este defecto conlleva a la acumulacion de glucoesfingolipidos, Gb3 de forma mayoritaria, en los lisosomas de varios tejidos; principalmente en el epitelio vascular, renal, cardiaco y el sistema nervioso. De acuerdo con el tipo de mutacion en el gen GLA (gen que codifica para la sintesis de la ?-galactosidasa A) y el inicio de las manifestaciones clinicas, los casos de EF se clasifican en dos tipos de fenotipos: el tardio y el clasico. Las manifestaciones clinicas del fenotipo clasico en los varones, incluyen las acroparestesisas; angioqueratomas; hipohidrosis; opacidad corneal y lenticular; disfuncion cardiaca; alteraciones renales y del sistema nervioso central. Las mujeres portadoras pueden ser asintomaticas o llegar a desarrollar el fenotipo clasico debido al fenomeno de inactivacion del cromosoma X. El diagnostico en la EF, probablemente, esta subestimado debido a la naturaleza no especifica de las manifestaciones clinicas asociadas a la enfermedad. El tratamiento en las primeras fases de desarrollo de la enfermedad es muy importante para la mejora de calidad de vida del paciente e impedir secuelas irreversibles. Hasta la fecha se han descrito mas de 600 mutaciones causales de EF (ver enlaces), ademas el gen GLA presenta siete variantes fisiologicas de ayuste alternativo y la alteracion del patron de ayuste, se genera por una gran cantidad de esas mutaciones. Las mutaciones exonicas pueden tambien alterar el patron de ayuste, pero no son reconocidas facilmente. Han sido descritas un gran numero de variantes polimorficas del gen GLA pero no se ha demostrado si la herencia de haplotipos formados por la combinacion de estas variantes puede causar EF. El haplotipo complejo intronico (HCI) dentro del gen GLA (IVSO-10C>T, IVS2-76_80del5, IVS4-16A>G, IVS6-22C>T) ha sido asociado a neuropatia de fibra fina y en un estudio de cribado el 8,9% de sujetos con sintomas de EF presenta este haplotipo. El haplotipo IVS2-76_80del5, IVS4-16A>G, IVS6-22C>T ha sido detectado en pacientes con afectacion renal. Por otra parte la mutacion G183V tambien ha sido asociada a la EF; esta mutacion se encuentra en la junta del exon 3 con el 4 en la region codificante del gen GLA, causando el cambio de aminoacido 183 en la secuencia proteica de la enzima y posiblemente un patron aberrante de ayuste. La identificacion de los pacientes de Fabry en la poblacion general esta dificultada por la baja prevalencia de la enfermedad y la naturaleza heterogenea de sus sintomas. El diagnostico viene determinado por niveles bajos de actividad enzimatica y confirmado por el estudio mutacional. El problema es que la enfermedad carece de biomarcadores que reflejen el estado del paciente. El analisis enzimatico no es adecuado para el diagnostico y seguimiento de mujeres heterocigotas, ya que la expresion de la enzima depende del patron de activacion del cromosoma X, o para varones con variantes atipicas de la enfermedad en los que la actividad residual es muy alta. No existe una relacion entre el genotipo y el fenotipo que presentan los pacientes. La terapia principal de la enfermedad se basa en la administracion de la enzima recombinante humana por via intravenosa. Aunque la respuesta a la terapia en muchos casos es buena, no refleja una mejora en todas las morbilidades asociadas a la EF. Existen indicios de que hay otros mecanismos implicados en el desarrollo de la enfermedad y el conocimiento molecular de esos mecanismos, puede permitir identificar nuevas dianas terapeuticas para la mejora de la calidad de vida de los pacientes con EF. Teniendo en cuenta estos hechos nos planteamos los siguientes objetivos: 1.-Caracterizar funcionalmente las variantes del haplotipo complejo intronico (IVSO-10C>T, IVS2-76_80del5, IVS4-16A>G, IVS6-22C>T) y G183V encontradas en un grupo de individuos con y sin sintomas y signos de EF y profundizar en los mecanismos moleculares patologicos relacionados con las diferentes manifestaciones clinicas de la enfermedad. 2.-Identificar los mecanismos epigeneticos relacionados con las diferentes variantes clinicas de la EF. 3.-Buscar nuevos biomarcadores de diagnostico y seguimiento de la enfermedad. 4.-Realizar una prueba de concepto de aplicacion de farmacos hipometilantes en lineas primarias de fibroblastos en la EF.