Determinação dos efeitos do gossipol sobre o ciclo estral, a foliculogênese e o desenvolvimento embrionário precoce de roedores e galinhas

Gossipol e um composto fenolico produzido pelas glândulas de pigmento presente nas raizes, caules, folhas, sementes e botoes de flores do algodao (Gossypium spp). O farelo e a torta de algodao sao subprodutos do algodao utilizados para a alimentacao animal, pois sao ricos em oleo e proteinas. No entanto, o gossipol limita a utilizacao do algodao na alimentacao animal, pois altas concentracoes desta substância podem ser responsaveis por sinais clinicos agudos de intoxicacao, sendo o efeito toxico mais comum e a reducao na reproducao de machos e femeas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do gossipol no ciclo estral, na foliculogenese in vivo e in vitro e no desenvolvimento de embrioes in vitro de roedores e galinhas. Para o primeiro experimento, foram utilizadas 24 ratas Wistar, distribuidas em dois grupos iguais: um grupo controle (injecao de solucao salina, por via subcutânea) e o outro tratado com gossipol (25 mg/kg/dia, por via subcutânea) durante 15 dias. As ratas sofreram eutanasia apos o ultimo dia do tratamento para coleta de sangue e de fragmentos de ovarios, utero e tireoide. Foi coletado sangue para analise hormonal por ELISA e os ovarios foram coletados para estudo histologico para avaliacao qualitativa e quantitativa dos foliculos ovarianos. Para o segundo experimento, foram necessarios 32 ovarios de ratas e camundongas e quatro de galinhas. Os ovarios das ratas e de camundongas, e fragmentos dos ovarios de galinhas foram cultivadas em placas de 24 pocos de cultura de celulas contendo 1 ml de meio de cultura especifico. Foram testadas quatro concentracoes de gossipol: 0 (controle), 5, 10 e 20 ug/mL. Todas as placas foram incubadas a 39 °C e 5% de CO2 durante 24 horas e sete dias. Apos a incubacao, os ovarios foram fixados e processados para analise histologica. Para o terceiro experimento, femeas nuliparas de camundongos Balb-C foram superovuladas e em seguida, alocadas com machos. No dia seguinte, foi realizada a colheita de embrioes na fase de 2-8 celulas. Foram realizadas lavagens sequenciais das tubas para remocao dos embrioes com meio HTF modificado. Lotes de 5 8 embrioes coletados e selecionados foram transferidos para novo meio de cultivo HTF sem HEPES suplementado com 10% de SFB. Posteriormente foram recolhidos e depositados em microgotas (30 µl) de meio suplementado em placas de 35x10 mm. Os embrioes foram cultivados em meio sem a adicao de gossipol (grupo controle) ou com concentracoes de 5, 10 e 20 µg/ml de gossipol, adicionadas em cada gota. Estas gotas foram imersas em oleo mineral e cultivadas em estufa com 5% de CO2 a 37 °C, por 24 horas. Apos o cultivo, os embrioes foram corados para a deteccao de membranas rompidas e de celulas em processo de morte celular. Pode-se observar que o gossipol promove degeneracao de foliculos ovarianos e embrioletalidade, e esta toxicidade ocorre por meio de acao direta do gossipol e nao por algum produto de sua biotransformacao