含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽的白细胞介素-24突变体真核表达载体的构建及其体外抗肝癌作用

目的构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽的白细胞介素（IL）-24突变体（RGD-IL-24）真核表达质粒，观察其对肝癌细胞的抑制作用。方法利用重叠PCR技术在IL-24cDNA中插入GGT三个碱基，获得RGD—IL-24cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建pcDNA3．1／RGD—IL-24。将pcDNA3．1／RGD—IL-24及作为对照的pcDNA3．1／IL-24转染肝癌细胞HepG2，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测IL-24mRNA表达；Westernblot检测IL-24蛋白表达；噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖；FITC-AnnexinV染色检测细胞凋亡；Westernblot检测bax、bcl-2表达。结果测序证明pcDNA3．1／RGD—IL-24构建成功。RT—PCR、Westernblot证实转染pcDNA3．1／RGD—IL-24的肝癌HepG2细胞表达IL-24。pcDNA3．1／RGD—IL-24、pcDNA3．1／IL-24处理组HepG2细胞存活率分别为（0．382±0．064、0．563±0．038），凋亡细胞阳性率分别为（0．346±0．049、0．163±0．087），两组差异均有统计学意义。Westernblot证实pcDNA3．1／RGD—IL-24促进bax表达、抑制bel-2表达作用强于pcDNA3．1／IL-24。结论RGD-IL-24真核表达质粒不仅不影响IL-24表达，且能显著增强IL-24诱导肝癌细胞凋亡及抑制肿瘤生长作用。