Etude structurale du complexe aspartyl-arnt synthetase d'e. Coli - arnt#a#s#p d'e. Coli

Ce travail s'insere dans le cadre general de l'etude des aminoacyl-arnt synthetases et plus particulierement des aspartyl-arnt synthetases, poursuivie au laboratoire depuis de nombreuses annees. Plus precisement, ce travail a porte sur l'etude du complexe entre l'aspartyl-arnt synthetase d'e. Coli et l'arnt#a#s#p d'e. Coli. Des cristaux de complexe binaire en presence ou non de petits substrats ont ete obtenus et leurs structures 3d resolues : celle du complexe binaire aspartyl-arnt synthetase - arnt#a#s#p a 3. 2 a de resolution, celle du complexe binaire en presence d'amppcp a 3. 5 a, en presence d'atp a 2. 3 a et enfin en presence d'aspartyl adenylate a 2. 4 a. L'etude structurale d'un tel systeme implique differentes etapes: _ la purification des macromolecules, _ la cristallisation et l'enregistrement des donnees de diffraction a l'aide du rayonnement synchrotron, _ la resolution et l'affinement de la structure, _ l'analyse et la comparaison de la structure du complexe homologue d'e. Coli avec les structures d'aspartyl-arnt synthetases deja resolue au laboratoire. Ce travail a permis d'apporter des donnees nouvelles portant sur : _ la description de la reconnaissance entre l'arnt et la synthetase dans le cas de l'aspartyl-arnt synthetase d'e. Coli en incluant le role des molecules d'eau, _ la mise en evidence des caracteristiques propres aux aspartyl-arnt synthetases d'eubacteries, d'archebacteries et d'eucaryotes, _ la description de la deuxieme etape de la reaction d'aminoacylation dans le cas de l'aspartyl-arnt synthetase d'e. Coli, _ la validation, dans les differents mondes, des deux etapes du mecanisme d'aspartylation, mecanisme deja propose sur les bases du complexe de levure, et une proposition d'extension du mecanisme d'aminoacylation aux synthetases de classe ii. Ce travail a egalement permis de mettre en evidence pour la premiere fois la fixation d'atp ou d'amp par le domaine d'insertion de l'aspartyl-arnt synthetase d'e. Coli. , domaine qui presente des analogies de repliement avec le domaine catalytique des synthetases de classe ii.