GENOTOXICIDADE E CITOTOXICIDADE EM PEIXES SUBMETIDOS AO TRIFLUMURON UTILIZADO NAS CULTURAS NO RIO GRANDE DO SUL

1 Introducao A producao de alimentos teve seu processo acelerado a partir do desenvolvimento das plantas transgenicas por meio da biotecnologia, embora isso nao tenha acabado com as intercorrencias de plantas invasoras, insetos e fungos que causam prejuizos nas culturas. O Brasil e o maior consumidor mundial de quimicos, ultrapassando a marca de 1 milhao de toneladas, o que equivale a um consumo medio de 5,2 kg de agrotoxico ao ano por pessoa, segundo dados do Instituto Nacional de Câncer (INCA). Dentre esses agrotoxicos se destaca o uso de inseticidas utilizados no controle de pragas agricolas nas diversas etapas de producao. O “Triflumuron” [1-(2-chlorobenzoyl)-3-(4-trifluoromenthoxyphenyl)urea], pertencente ao grupo das benzo-fenil-ureias (BPU’s) e classificado como um CSI (Inibidores da Sintese de Quitina) que tem sido amplamente utilizado pelos agricultores no controle da larva  Helicoverpa armigera na cultura de soja no Rio Grande do Sul. Ele tem classificacao toxicologica de nivel II e classificacao quanto ao potencial de periculosidade ambiental de nivel III, segundo a portaria normativa no 84, de 15 de outubro de 1996, do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renovaveis (IBAMA), com base no decreto no 98.816/90. Esses defensivos interagem com organismos vivos e podem trazer danos ao material genetico, sendo necessario o uso de testes para avaliar o potencial genotoxico dessas substâncias. Para esse proposito foi usado o teste de micronucleo (SCHMID, 1975), adaptado para peixes. O micronucleo e resultado de substâncias que podem levar a clastogenicidade e aneugenicidade (HAYASHI et al., 1994 apud MATOZO et al., 2015). Nesse mesmo teste, pode-se tambem verificar a ocorrencia de anormalidades nucleares, que sao formas inadequadas em que os nucleos dos eritrocitos dos peixes podem estar configurados. 2 Objetivo Avaliacao do potencial genotoxico e citotoxico em peixes submetidos ao triflumuron utilizado nas diversas culturas no Rio Grande do Sul. 3 Metodologia Neste trabalho foram utilizados peixes do genero Astyanax sp., (lambari). Os peixes foram capturados em Guarani das Missoes – RS, municipio vizinho de Cerro Largo em acudes e riachos de uma propriedade rural e levados para o Laboratorio de Genetica da UFFS. Os peixes foram alocados em aquarios para aclimatacao, contendo 34 litros de agua de torneira decantada. Para cada tratamento e controle foram usados seis peixes. Para uso de animais, essa proposta foi submetida ao Comissao de Etica no Uso de Animais (CEUA), da UFFS e aprovado com o protocolo no 23205.000952/2017-89. Para cada aquario de tratamento foram usadas diferentes concentracoes de Triflumuron.  As concentracoes foram: 0,30 mL/L (concentracao de campo); 0,15 mL/L e 0,45 mL/L e um aquario para o controle sem o Triflumuron. Apos 96 horas os peixes foram anestesiados, com posterior corte da cauda para a coleta de sangue periferico por meio de capilares de vidro embebidos em NaEDTA. (anticoagulante) para confeccao de esfregacos. Apos secagem e fixacao em metanol as lâminas foram coradas nesta sequencia: submersas em HCl 5N por 15 minutos para a hidrolise, seguido com a lavagem das lâminas e secagem; submersas em Reativo de Schiff por duas horas para coloracao do nucleo dos eritrocitos. Para a coloracao do citoplasma foi usado o corante Fast-Green por 3 minutos. Para a observacao dos esfregacos foi usado Microscopio Optico (M.O.) em aumento de 1000x. De cada peixe foram contabilizadas 2000 celulas, nas quais foram observados a existencia de micronucleos e anormalidade nucleares, de acordo com Rivero (2007). Para analise de alteracoes no figado foram confeccionadas lâminas permanentes com coloracao Hematoxilina-Eosina (HE) e analisadas em M.O em aumento 1000X. Os resultados foram submetidos ao teste nao-parametrico Kruskal-Wallis no software R, na interface RStudio, com nivel de significância de 5% (p 0,05) ja que nao foram registrados a presenca de micronucleos nas 48.000 celulas contabilizadas. Contudo, o numero de anormalidades nucleares (AN) foi diferente entre os grupos de tratamento e controle, sendo que o tratamento de 0,45 mL/L apresentou maior frequencia de AN (figura 1). Para fim de registro, as AN foram classificadas em cinco tipos: “blebbed”, com evaginacao leve do nucleo; “lobed”, com evaginacao maior que a blebbed; “notched”, com um corte consideravel do nucleo; binucleada, quando o eritrocito apresentou “dois nucleos” aparentes (RIVERO, 2007); e vacuolo, quando o nucleo apresentou uma cavidade dentro do limite nuclear. Apesar de nao ter sido registrada a presenca de MN e o teste nao ter sido significativo, nao podemos afirmar que o triflumuron nao cause efeitos citotoxicos e mutagenicos sobre os seres vivos nao-alvo. O alto indice de AN sugere que houve alteracoes nos processos de divisao celular alterando o termino da mitose. Os figados dos peixes submetidos aos tratamentos apresentaram alteracoes importantes como: nucleos posicionados lateralmente; regioes de degeneracao de hepatocitos; citoplasma vacuolizado e hipertrofia nuclear (ROCHA et al., 2010), o que pode sugerir deficit nos eventos metabolicos devido a exposicao ao triflumuron. 5 Conclusao E de grande importância os estudos de genotoxicidade e citotoxicidade para avaliar possiveis danos aos organismos que nao sao alvo para os diferentes tipos de inseticida, tais como peixes, aves e plantas e o ser humano.  Pela falta de compreensao do mecanismo do triflumuron, e necessario que se facam mais testes e estudos a fim de determinar se o mesmo pode trazer maleficios para o ecossistema em que e aplicado.