Expression et étude fonctionnelle du groupe miR-106-363 à l'aide des vecteurs rétroviraux

Recemment, notre laboratoire a identifie un nouveau site commun d'integration retrovirale sur le chromosome X chez la souris (S. Landais et al., 2005). Ce site a ete associe a un nouveau gene, appele Kaplan integration site 2 (Kis2), dont l'expression est augmentee dans les cellules tumorales. De facon surprenante, il ne code pour aucune proteine, et produit cinq transcrits d'ARN non codant comportant le precurseur (primiARN) du groupe de six micro-ARN (miARN): miR-106-363 (S. Landais et al., 2007). La comprehension de la fonction des produits de ce gene ainsi que les voies metaboliques dans lesquelles ils sont impliques pourraient approfondir notre connaissance de la regulation de l'expression des miARN regroupes. L'expression transitoire de ce locus dans des vecteurs d'expression eucaryotes s'est averee non fructueuse. Afin de contourner cet obstacle, nous avons eu recours a l'infection des cellules par les retrovirus recombinants contenant le groupe miR-106-363 comme outil permettant l'expression stable du gene d'interet. Dans ce travail nous avons etabli deux lignees cellulaires, NIH 3T3 (fibroblastes murins) et Ti6 (lymphocytes), qui expriment le gene Kis2 et le groupe miR-106-363 a l'aide de trois constructions retrovirales. Grâce a la construction pMSCV-Kis2, nous avons surexprime les miARN du groupe miR-106-363 dans les NIH 3T3 et les Ti6. La construction pLXSN-Kis2 a permis de produire l'un des plus grands transcrits du gene Kis2 (1.7 kb) dans la lignee Ti6. Le test d'independance d'ancrage realise sur les cellules exprimant le groupe miR-106-363 de facon stable a confirme son implication dans la transformation maligne et a etabli une correlation entre le niveau d'expression des ces miARN et la gravite de la transformation. L'obtention d'un systeme d'expression efficace de Kis2/miR-106-363 nous permettra d'etudier plus en detail la fonction de ces miARN, d'identifier leurs cibles et leurs partenaires d'interaction ainsi que d'etudier leur role in vivo chez la souris. De plus, les cellules qui expriment le gene de maniere stable seront la source infinie du materiel permettant de conduire les experiences a plus grande echelle y compris l'etude des molecules inhibitrices pour le traitement de la leucemie de type T. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLES DE L’AUTEUR : oncogenese, ARN non codant, miARN, systeme d'expression retroviral.