Impacto da inibição de survivina na heterogeneidade e instabilidade cromossômica em glioblastoma

Survivina e uma proteina membro da familia de inibidores de apoptose que apresenta elevada expressao em diversos tumores malignos, sendo considerada um potencial alvo terapeutico, principalmente em Glioblastoma (GBM). GBM e o tumor maligno mais comum do sistema nervoso central em adultos, sendo invasivo e metastatico, alem de possuir altos niveis de instabilidade cromossomica (CIN). Os objetivos deste trabalho foram identificar o perfil cariotipico de celulas de GBM e avaliar os efeitos do inibidor transcricional de Survivina, o Acido Tetra-O-metil Nordihidroguaiaretico (M4N), sobre a proliferacao, heterogeneidade citogenetica e perfil CIN. Para isso, 10x103 celulas da linhagem celular de GBM humano U251 foram semeadas em placas de 96 pocos a 37°C e 5% de CO2. Apos 24 horas, as celulas foram tratadas com 0?M, 5?M, 10?M, 20?M, 40?M, e 60?M de M4N. Posteriormente, foram obtidas as curvas dose-resposta nos tempos de 24, 48 e 72 h, utilizando o reagente Rezasurina. Diferencas estatisticas (p<0.05) foram determinadas utilizando o software GraphPad Prism 5®. Para a analise citogenetica, culturas celulares 75% confluentes foram expostas a 5mg/mL de colchicina por 6 h, tripsinizadas, coletadas para hipotonizacao com KCl (0,75 M) e fixacao com acido acetico:metanol (1:3). Apos o bandeamento GTG, dezenove celulas metafasicas foram fotografadas e analisadas utilizando o software GeneAll® de acordo com o criterio da ISCN (2016). Resultados preliminares apontam a dose sub-letal de 10?M no tempo de 48 h para futuras analises cariotipicas. Citogeneticamente, as celulas de U251 foram caracterizadas pela presenca de celulas hipo e hiperdiploides com um numero cromossomico modal entre 43 e 48 cromossomos, apresentando monossomias, principalmente dos cromossomos 10, 15, 18 e 20, rearranjos estruturais envolvendo o cromossomo 11, alem da presenca de multiplos cromossomos marcadores (1~8), resultando na formula cromossomica: 43~48, XY, -Y [8], -6[4], -7[9], -8[4], -9[6], -10[10], der (1) t (11?) p (12, ?) [19], der (11) t(11,?) p (14, ?) [8], -11[3], -14[6], - 15[12], -16[3], -17[3], -18[14], +19[2] -19[3], -20[10], -21[5], -22[8], +1~8mar[cp19]. Estes resultados demonstram alto nivel de heterogeneidade citogenetica presente nas celulas U251, a mesma que poderia se ver afetada apos a inibicao transcricional da survivina, produzida pelo M4N.