腺病毒介导的PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclinD1、p21表达的影响

目的：构建携带抑癌基因PTEN的腺病毒载体，探讨P7酬基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyc-linD1、p21表达的影响。方法：采用RT-PCR方法从大鼠海马神经元扩增目的基因PTEN，连接入pENTR2A载体，在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增。以携带PTEN基因的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3。采用间接免疫荧光法检测细胞中PTEN的过表达情况。Western印迹检测PTEN、cyclinD1和p21表达的变化，通过细胞生长实验、平板克隆实验检测PTEN对PC一3细胞增殖能力的影响。结果：成功构建重组腺病毒载体Ad-PTEN；PC-3细胞经Ad．PTEN感染后PTEN蛋白表达水平明显增加。Western印迹实验所得条带进行灰度值分析后与B．actin求比值，PTEN蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达（0．215±0．065）明显高于对照组[（0．0524-0．009），t=4．30，P〈0．05]和Ad-LacZ组[（0．056±0．008），t=4．21，P〈0．05]。cyclinD1蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达（0．256±O．072）明显低于对照组[（0．502±0．087，t=3．77，P〈0．05）]和Ad—LacZ组[（0．498±0．081，t=3．87，P〈0．05）]。p21蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达（0．589．4-0．076）明显高于对照组[（0．146±0．026，t=9．55，P〈0．01）]和Ad-LacZ组[（0．163±0．024，t：9．26，P〈0．01）]。MTr实验显示Ad．PTEN对PC-3细胞的抑制作用自48h后（21．98％）有显著性（t=6．80，P〈0．01）。平板克隆实验显示Ad-PTEN组克隆形成率[（37．4±4．18）％]明显低于对照组[（54．9±4．81）％，t=4．76，P〈0．01]及Ad-LacZ组[（56．5±5．42）％，t=4．83，P〈0．01]。结论：通过腺病毒载体Ad-WEN使PC-3细胞表达PTEV基因，可以明显抑制细胞的增殖，并可降低cyclinD1表达，同时增加p21的表达。