EVALUATION OF FOUR DIFFERENT DNA EXTRACTION METHODS IN COAGULASE-NEGATIVE STAPHYLOCOCCI CLINICAL ISOLATES

Atualmente, para extrair o DNA bacteriano, existem diversos metodos baseados em diferentes principios. Entretanto, a quantidade e qualidade do DNA obtido por cada um destes metodos e variavel e depende do tipo de micro-organismo em questao; os estafilococos coagulase-negativos (CoNS), por exemplo, possuem parede celular espessa dificil de lisar. O objetivo deste estudo foi comparar a quantidade e a qualidade do DNA extraido de isolados clinicos de CoNS utilizando quatro metodologias diferentes: dois protocolos caseiros e dois kits comerciais. A determinacao da quantidade e da qualidade do DNA foi realizada por espectrofotometria. O DNA extraido tambem foi analisado em eletroforese em gel de agarose e por PCR. A concentracao media de DNA foi mais alta no metodo de lise termica (). Entretanto, com relacao a qualidade do DNA, o kit comercial que utiliza um metodo de extracao baseado em uma coluna de separacao apresentou melhor resultado (media da relacao A260/280 = 1,95). As quatro tecnicas testadas forneceram DNA passivel de amplificacao por PCR, porem com diferentes rendimentos. A qualidade do DNA extraido de bacterias e importante, pois possibilita a realizacao de maior numero de tecnicas de biologia molecular e tambem armazenamento do material por maior periodo de tempo. Neste sentido, a tecnica de extracao por coluna de separacao apresentou melhor desempenho frente aos CoNS.