金霉素生物合成基因簇中调控基因 ctcB 的功能

目的 研究金霉素产生菌中SARP家族转录调控基因 ctcB 的作用。 方法 利用大肠杆菌、链霉菌的属间接合转移和同源重组双交换的方法，构建 ctcB 基因缺失突变株。通过cDNA在相邻同转录方向的基因间隔进行PCR验证，确定金霉素生物合成基因簇中的转录单元。利用荧光定量RT-PCR方法进行突变株金霉素生物合成基因簇的转录水平检测。随后，生物信息学预测分析了金霉素生物合成基因簇内CtcB与DNA的结合位点。 结果 获得了 ctcB 基因缺失的双交换突变株。发酵结果显示，该突变株失去产生金霉素与四环素的能力。金霉素生物合成基因簇内有6个共转录单元，其中4个共转录单元在 ctcB 基因缺失突变株中转录水平明显下降。软件分析预测到一致性较高的CtcB结合重复序列。 结论 ctcB 正调控金霉素生物合成结构基因 ctcG - D 、 ctcH - K 、 ctcN - P 、 ctcW - T 4个转录单元和 ctcQ ，为进一步研究 ctcB 调控机制奠定了基础。