表达金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的高靶向、双调控溶瘤腺病毒载体的构建、鉴定及其抗膀胱肿瘤作用

目的构建表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的高靶向、双调控选择增殖型溶瘤腺病毒SG502-SEA及对照组携带超抗原SEA基因的非增殖溶瘤腺病毒DC318-SEA，并探讨其潜在的抗膀胱肿瘤作用。方法将超抗原SEA基因片段经SpeI和SalI双酶切后，克隆入经同样酶切后的非增殖溶瘤腺病毒载体pSG218中，将鉴定正确的腺病毒载体命名为pDC318-SEA。同样方法将超抗原SEA基因片段克隆入双调控特异性增殖溶瘤腺病毒载体pSG502中，将鉴定正确的腺病毒载体命名为pSG502-SEA。将以上两种携带SEA基因的病毒载体与病毒骨架质粒PPE3-ccdB共转染293细胞，9—14d出现病毒空斑，经过3次病毒空斑纯化，提取腺病毒DNA，应用PCR进行鉴定，经鉴定正确的腺病毒分别命名为DC318-SEA和SG502-SEA。大量扩增后，氯化铯梯度离心纯化腺病毒，测病毒滴度。结果经PCR及酶切鉴定，SEA基因成功克隆到两病毒载体中，可以表达SEA基因，且病毒滴度为2．5×10^10pfu／ml。结论成功构建表达超抗原SEA基因的双调控、高靶向选择增殖型溶瘤腺病毒SG502-SEA及对照组携带超抗原SEA基因的非增殖溶瘤腺病毒DC318-SEA。