Relación de los linfocitos B1 (CD 19+ CD 15+) con la Enfermedad de Crohn

La EC es un proceso inflamatorio cronico y recidivante, sin tendencia a la curacion, que puede afectar a todo el tracto gastrointestinal. Se piensa que resulta de una respuesta inmune aberrante y continua contra la microbiota intestinal, catalizada por una susceptibilidad genetica individual y multiples factores medioambientales. Aunque hay multiples conocimientos sobre su fisiopatologia, su etiologia permanece desconocida. Hay varias teorias que se han descrito en las ultimas decadas para hipotetizar sobre la etiologia de la EC: la teoria infecciosa, la autoinmune, la genetica, la de la higiene y la autoinflamatoria. En los ultimos anos, se esta definiendo la EC como una inmunodeficiencia, sin conocerse aun el mecanismo inicial exactamente. En la presente tesis aportamos el papel de los linfocitos B1 (un tipo de linfocitos que se localizan fundamentalmente en peritoneo y pleura, que liberan Ig M al medio extracelular, y producen tambien Ig A) en la fisiopatologia de la enfermedad. -METODOLOGIA El proyecto nacio de la hipotesis de una relacion de la poblacion de linfocitos B1 con la EC, en concreto una deficiencia de los mismos, proponiendo los siguientes objetivos: Objetivo principal: medir los niveles de linfocitos B1 (CD19+CD5+) en sangre periferica en pacientes con EC y compararlos con controles sanos, e interpretar los resultados de su relacion con la EC, incluyendo gravedad y evolucion de la misma. Objetivos secundarios: -Valorar los niveles de Ig M e Ig A en pacientes con EC. -Correlacionar los niveles de Ig M e Ig A en suero de pacientes con EC con los niveles de Linfocitos B1. -Correlacionar los niveles de linfocitos T?? y ?? con los linfocitos B1. Se realizo un estudio prospectivo y observacional de casos y controles. Se reclutaron un total de 128 sujetos, 64 pacientes con EC y 64 sanos control, apareados por sexo y grupo de edad. Se definieron 3 escenarios clinicos: paciente nuevo, paciente en remision y paciente en brote. Se estudiaron en los pacientes multiples variables: sexo, edad, indices de gravedad (Crohn's disease activity index (CDAI) e indice de Harvey y Bradshaw), farmacos, indice de gravedad endoscopica (SES-EC) y como factores pronosticos: hospitalizaciones, brotes de la enfermedad, visitas urgentes a la consulta de digestivo, visitas al servicio de urgencias por la EC, intervenciones quirurgicas, aumento de dosis de farmacos, adicion de nuevos farmacos y tabaquismo. Tanto en pacientes como en controles se analizo: hemograma, PCR, VSG y poblaciones linfocitarias. Todos los datos recogidos se introdujeron en una base de datos y se analizaron mediante el programa estadistico SPSS. Se comprobo la asuncion de distribucion normal para las variables continuas mediante pruebas graficas y la prueba de Kolmogorov-Smirnov con la correccion de la significacion de Lilliefors. Cuando se asumio normalidad se utilizo el t-test para comparar las medias de las variables cuantitativas y se utilizo el test de ?2 para el contraste de proporciones entre categorias. En caso de no aceptarse la hipotesis de normalidad de la variable cuantitativa se utilizo la prueba no parametrica U de Mann-Whitney. El nivel de significacion asumido fue de p < 0,05. - RESULTADOS Y DESARROLLO ARGUMENTAL De los 64 pacientes con EC, 35 (54,7%) fueron hombres y 29 (45,3%) mujeres, con el mismo numero de hombres y mujeres en los controles. La edad media de los pacientes con EC fue de 38,9 ± 13,8 vs 42,9 ± 16,8, en los controles, p = 0,144, sin existir diferencias. Se analizaron las caracteristicas del hemograma de los pacientes con EC y controles, objetivandose diferencias significativas en: niveles de linfocitos (menores en EC), plaquetas (mayores en EC) y hemoglobina (menores en EC). Se estudiaron las poblaciones linfocitarias y se compararon las de los pacientes con EC con los controles, hallandose diferencias significativas en linfocitos CD3+, linfocitos CD8+, linfocitos CD56+, linfocitos CD3+ ?? y ??, linfocitos CD4+ ??, linfocitos CD8+ ?? y ??, todos ellos menores en pacientes con EC. No hubo diferencias significativas en los linfocitos B en pacientes con EC frente a los controles, sin embargo si se objetivo un numero menor de linfocitos B1 en pacientes con EC. La media de linfocitos B1 en los pacientes con EC fue 0,0146 ± 0,0207 x 109/L, frente a 0,251 ± 0,0168 de los controles sanos. La diferencia fue estadisticamente significativa, con p = 0,002. Analizando los niveles de linfocitos B1, no hubo significacion entre los distintos escenarios de la enfermedad entre si (debut, remision y actividad). Tampoco en los niveles de linfocitos B1 en los grupos de edad de la clasificacion de Montreal, ni entre las localizaciones de la enfermedad: ileal, colonica e ileocolonica. Se obtuvieron niveles de linfocitos B1 superiores en el patron inflamatorio frente al patron fistulizante, sin hallar diferencias significativas entre el resto de combinaciones de los patrones, aunque los niveles eran menores conforme progresaba el patron en gravedad: inflamatorio? estenosante? fistulizante. No hay diferencias significativas en los niveles de linfocitos B1 entre los pacientes segun lleven o no tratamiento (p = 0,867). Analizando cada uno de los tratamientos por separado, tampoco se hallaron diferencias significativas en el numero de linfocitos B1. Hallamos un numero menor de linfocitos B1 en los pacientes que a lo largo de la historia de su enfermedad han sido operados en relacion a su enfermedad (EC), bien fuera antes o despues de la inclusion en la investigacion, o incluidos en el momento de la cirugia. No se obtuvieron diferencias significativas en los niveles de linfocitos B1 entre los pacientes con EC que previamente a la inclusion habian sufrido una intervencion quirurgica y los que no. La diferencia es marcada, pero no es significativa por el numero bajo de pacientes con cirugia previa, 9. Se objetivo una clara diferencia entre los pacientes que tras la inclusion presentaban un empeoramiento y precisaban de cirugia, con un numero de linfocitos mucho menor, y diferencia estadisticamente significativa, respecto a los pacientes que no precisaban de cirugia tras la inclusion. Se analizaron los niveles de inmunoglobulinas (Ig A, Ig G e Ig M) en los pacientes con EC y los controles, sin hallar diferencias significativas. No se ha encontrado una correlacion entre la frecuencia de linfocitos B1 y las Igs M, G, y A. Para calcular la deficiencia de linfocitos B1 se ha calculado en valor por debajo del percentil 10 en los pacientes control: deficiencia B1: CD19+CD5+ < 0,0057 x 109/L. No se objetivo relacion estadisticamente significativa entre el deficit de B1 (percentil 10) y los distintos escenarios clinicos de la EC (debut, remision o brote en actividad). Tampoco entre los grupos de edad de la clasificacion de Montreal, la localizacion de la EC, ni el el patron de la EC (inflamatorio, estenosante o fistulizante). Se analizo la relacion entre la deficiencia de linfocitos B1 (percentil 10) y el antecedente de cirugia de la EC. Los pacientes con EC y deficiencia de linfocitos B1 presentan una probabilidad 6 veces mayor de antecedentes de cirugia previa relacionada con su enfermedad. Se objetivo la relacion entre la presencia de deficit de linfocitos B1 y la presencia futura de un brote quirurgico, hallandose que la probabilidad de que un paciente con EC y deficiencia de linfocitos B1 presente una complicacion quirurgica es de casi 7 veces mas que el paciente con EC sin deficiencia de B1. Es decir, la deficiencia en los pacientes con EC aumenta la posibilidad de complicacion quirurgica en mas del 700 %. No hubo relacion entre los niveles de linfocitos B1 con la posibilidad de presentar brote en el seguimiento. Se calculo la relacion entre los valores de linfocitos B1 y la necesidad de escalar tratamiento para la enfermedad, sin poderse realizar estudios ya que solo a 3 pacientes se les escalo el tratamiento en el seguimiento. Se analizo la relacion entre el deficit de linfocitos B1 medido como percentil 10, con la presencia o no de enfermedad perianal, sin hallar relacion significativa. Sin embargo, hay un mayor porcentaje de pacientes deficientes en linfocitos B1 entre los que tienen afectacion perianal, y las frecuencias de linfocitos B1 son menores. Esto es por la N, que es pequena. Solo 7 pacientes tenian enfermedad perianal. Se realizo ileo-colonoscopia a 24 pacientes coincidiendo con la extraccion de sangre para el estudio, encontrando una relacion inversa entre los niveles de linfocitos B1 y el indice endoscopico de gravedad utilizado: Simple Endoscopy Score (SES-CD). Asi, la relacion del porcentaje de B1 y SES-CD fue de -0,559 (Rho de Spearman, p = 0,004), la relacion de B1 con SES-CD fue de -0,443 (Rho de Spearman, p = 0,030). Lo que indica que a menor B1 mayor gravedad endoscopica y viceversa. -CONCLUSIONES FINALES La frecuencia de linfocitos B1 (CD19+CD5+) en los pacientes de Crohn es significativamente mas baja que en los sujetos sanos, y la deficiencia de B1 alcanza casi al 50 % de los pacientes de EC. La frecuencia de linfocitos B1 (CD19+CD5+) en el patron estenosante y fistulizante es progresivamente mas baja que en el inflamatorio, siendo significativo en el fistulizante. Los pacientes con EC que sufren cirugia previa, durante o en brote posterior al estudio presentan frecuencia de linfocitos B1 mas baja que los que no sufren cirugia. Ademas, la deficiencia de B1 en los pacientes con EC aumenta mas de 7 veces la posibilidad de complicacion quirurgica. La actividad endoscopica medida con el indice SES-CD se correlaciona con el nivel de linfocitos B1. Estos datos sugieren que la deficiencia de linfocitos B1 (inmunidad innata) esta relacionada con la EC.