黄连金黄紫堇碱9-O-甲基转移酶基因的克隆及序列分析

克隆黄连（Coptis chineseFranch.）金黄紫堇碱9-O-甲基转移酶（Scoulerine-9-O-methyl-transferase,SMT）基因并做序列分析。采用RT-PCR方法,以新鲜的黄连嫩叶cDNA为模板,克隆出黄连SMT基因的cDNA序列。克隆到的cDNA序列全长为1 375 bp,编码一个350个氨基酸残基组成的多肽,其核酸序列与日本黄连、唐松草的SMT基因的cDNA序列同源性分别为97%与85%。将得到的序列提交GenBank,序列号为EU980450。与日本黄连、唐松草SMT基因的氨基酸序列比对,黄连SMT具有相同功能区域,因而可以参与金黄紫堇碱的9位氧原子的甲基转移反应。黄连SMT与其它植物SMT的氨基酸酸序列的进化分析表明,它与同为毛莨科黄连属的日本黄连的同源性较近。黄连N-甲基乌药碱-3′-羟化酶基因的成功克隆为黄连植物中小檗碱的基因工程等研究打下了良好的基础。