人miR-155真核过表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞中HBeAg的抑制效应

目的：构建人microRNA-155（miR-155）真核过表达载体,并探讨其对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen,HBeAg）的抑制作用,为研究其基因调控机制对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）复制及免疫状态影响提供实验基础.方法：以人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞基因组为模板,通过PCR扩增人miR-155前体序列,酶切后连接到pmR-mCherry质粒,构建pmiR-155真核过表达载体,然后进行酶切和测序鉴定.利用脂质体将pmiR-155转染HepG2.2.15细胞,同时设空质粒（pmR-mCherry质粒）转染组和空白对照组.转染24 h后荧光显微镜下观察细胞内Cherry表达,RT-PCR检测各组细胞内miR-155表达量以及ELISA法检测HBeAg分泌量的改变.结果：经测序证实,成功构建人pmiR-155真核过表达载体.转染细胞后进行应荧光观察,载体中Cherry有较好的表达活性.RT-PCR表明,与对照组细胞相比,pmiR-155组细胞内所表达的miR-155明显提高.ELISA结果示pmiR-155组细胞所分泌的HBeAg量显著低于空载组和空白组.结论：成功构建了人miR-155真核过表达载体;转染HepG2.2.15细胞后表达稳定;蛋白水平检测表明其可以抑制HepG2.2.15细胞中HBeAg的表达.