茶树β-1,3葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的优化表达

2007 
从茶树中获得β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-glu)基因cDNA,发现其中存在着一些序列,它们与核糖体竞争性地结合pET32a载体上的RBS位点,造成该基因cDNA在原核生物中很难表达。作者对其中的两处基因序列进行了突变,通过设计PCR引物,利用密码子的简并性,保证了突变后蛋白质的一级结构不变。使葡聚糖酶基因在大肠杆菌中明显表达。通过SDS-PAGE分析,证明表达产物分子量约75.8kD,与预计大小一致,并通过水杨酸法对其进行酶活测定,证明其有活性。
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