腺病毒介导 HSV-2 gD 基因修饰的树突状细胞疫苗制备

目的：生殖器疱疹尚无彻底治愈的方法。研制有效的生殖器疱疹病毒疫苗是预防和治疗HSV-2感染的关键，文中探讨制备腺病毒介导的HSV-2 gD基因修饰的树突状细胞（ dendritic cell ， DC）疫苗的可行性。方法将HSV-2 gD蛋白基因克隆到质粒载体Shuttle-2，重组质粒酶切鉴定、测序鉴定后构建重组腺病毒pAdeno-HSV-2 gD。分离小鼠骨髓DC细胞， pAdeno-HSV-2 gD转染DC细胞后用流式细胞术检测DC表型，用免疫组化法、RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot 方法检测HSV-2 gD的表达情况。结果以HSV-2病毒DNA为模板，采用gD基因引物扩增出相应的目的片段。琼脂糖凝胶电泳显示，PCR产物gD基因同预期的大小一致（1182 bp）。 pAdeno-gD DNA用脂质体法转染293细胞10 d，反复冻融获得pAdeno-HSV-2 gD重组腺病毒，活性为4×1010 IU／mL。流式细胞仪检测结果显示：成熟DC和腺病毒感染后DC，CD40含量为（74．2±3．9）％、（81．3±3．1）％，CD80含量为（73．9±4．1）％、（80．4±2．9）％，CD86含量为（76．1±5．5）％、（83．7±3．9）％，均较不成熟DC的CD40、CD80、CD86含量[（9．7±0．5）％、（7．5±1．2）％、（5．2±1．1）％]升高（P＜0．01）。 pAdeno-HSV-2 gD-DC和细胞因子刺激诱导成熟的DC细胞表面分子表达差异无统计学意义（P＞0．05）。 RT-PCR、免疫组织化学方法证明HSV-2 gD能在DC细胞内表达，表达产物的SDS-PAGE和Western blot分析发现，在相对分子质量为43000处有外源蛋白表达，与预期蛋白条带一致。结论成功制备了pAdeno-HSV-2 gD-DC疫苗。