When engineering new recombinant factor IX molecules meets gene therapy : improvement of factor IX plasma level in patients with haemophilia B?

Introduction : L’hemophilie B (HB) est une maladie hemorragique hereditaire caracterisee par un deficit en facteur IX (FIX) de la coagulation. La therapie genique de l’HB par injection de virus adeno-associes (AAV) montre des resultats prometteurs, mais entraine une toxicite hepatique a forte dose. La creation de nouveau transgene de FIX permettant d’injecter de moindres doses d’AAV est un reel enjeu. Materiel et Methodes : Des transgenes therapeutiques exprimant une proteine humaine de FIX a demi-vie prolongee par fusion a l’albumine (hFIX-Alb) ou exprimant un FIX une activite specifique augmentee, le hFIX-E410H, ont ete crees et injectes a des modeles murins. Une nouvelle molecule recombinante de hFIX a demi-vie prolongee par fusion a la sous-unite B du FXIII via un linker clivable par le facteur X active (hFIX-LXa-FXIIIB) a ete cree, produite et caracterisee. Resultats : Le transgene hFIX-Alb n’accumulait pas le niveau plasmatique du FIX par rapport au FIX sauvage. Des experiences ont ete entreprises pour comprendre les mecanismes responsables du defaut d’expression. Le transgene hFIX-E410H, montrant une activite specifique augmentee in vitro et in vivo chez les souris HB, permettait de diminuer les doses d’AAV d’environ 2,5 fois. La molecule hFIX-LXa-FXIIIB etait fonctionnelle, corrigeait la generation de thrombine chez les souris HB, et presentait une demi-vie augmentee 3,9 fois chez la souris et 2,3 fois chez le rat. Conclusion : Nous avons developpe et caracterise de nouveaux transgenes de FIX modifies et une nouvelle molecule de FIX a demi-vie prolongee, qui pourraient constituer de nouvelles perspectives therapeutiques de l’HB