Nontransformed rabbit liver glucocorticoid receptor: purification, characterization and transformation

Resume La forme non transformee du recepteur a glucocorticoides du foie de lapin a ete purifiee environ 8 000 fois grâce a un protocole en trois etapes. La premiere etape a ete realisee par precipitation au sulfate de protamine permettant une purification de 5–6 fois avec un rendement de 85 %. La seconde etape par chromatographie d'affinite sur N -(12-dodecyl-amino) 9 α-fluoro-16 α-methyl-11 β, 17 α-dihydroxy-3-oxo-1,4-androsta-diene-17 β-carboxamide Sepharose a apporte un facteur de purification de l'ordre de 1 500 a 2 000 fois. L'etape finale mettant en œuvre la chromatographie d'exclusion haute performance aboutit a un facteur de purification voisin de 8 000 fois. La fraction obtenue s'est revelee pure a 60 %. Le recepteur purifie sous forme non transformee possede un coefficient de sedimentation de 9 S en gradient de sucrose 5–20 % prepare en tampon phosphate 0,16 M, un rayon de Stokes de 6,1–6,3 nm en gel filtration conventionnelle et haute performance. La specificite de liaison du recepteur purifie est identique a celle determinee sur des preparations cytosoliques. La chromatographie sur echangeurs d'ions et l'isofocalisation ont montre que la purification affecte la charge globale de la proteine. Ce phenomene pourrait etre du a des interactions entre le recepteur et des facteurs cytosoliques. L'electrophorese sur gel de polyacrylamide, en conditions denaturantes, a montre une bande majeure M r = 94 000 en parfait accord avec les valeurs precedemment decrites pour d'autres recepteurs a glucocorticoides. Apres elimination du molybdate puis exposition a 25°C en presence de 0,4 M KCl, le recepteur purifie reste transformable. La caracterisation des formes moleculaires transformee et non transformee a ete realisee grâce a la mesure de la liaison a des noyaux isoles, a l'affinite vis-a-vis des echangeurs anioniques et par HPLC. Les resultats montrent que, dans ces conditions, 40 % du recepteur purifie est transforme.