肺癌细胞抑制CD4＋T细胞IFN-γ基因表达的机制研究

目的：研究肺癌细胞能否直接影响CD4＋T细胞干扰素-γ（IFN-γ）基因启动子甲基化水平。方法：ELISA法检测肺癌组（n=30）及健康对照组（n=30）血浆IFN-γ水平;免疫磁珠分选两组外周血CD4＋T细胞（n=8）,提取DNA后经亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子进行TA克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析;建立健康人CD4＋T细胞与肺腺癌细胞株SPC-A1体外Transwell共培养体系（n=6）,并设健康人CD4＋T细胞单独培养为对照组,培养5 d后分别收集CD4＋T细胞。CD4＋T细胞按上述法进行TA克隆测序。同时CD4＋T细胞经anti-CD3、anti-CD28刺激6、24 h,ELISA法检测两组上清IFN-γ表达水平,RT-PCR检测CD4＋T细胞IFN-γmRNA表达水平。结果：肺癌组血浆IFN-γ水平显著低于健康对照组[（69.30±38.56）pg/ml vs（92.62±34.75）pg/ml,P=0.017];肺癌组CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于健康对照组（84.6%vs 68.6%,P〈0.001）;肺癌患者血浆IFN-γ水平与其基因启动子甲基化率呈负相关（r=-0.850 3,P=0.010 7）。体外Transwell共培养实验中,与对照组相比,实验组CD4＋T细胞anti-CD3、anti-CD28刺激6、24 h,IFN-γ表达水平显著下降[6 h：（14.53±7.12）pg/ml vs（36.14±23.51）pg/ml,24 h：（7.81±4.02）pg/ml vs（24.85±15.58）pg/ml],6 h对照组CD4＋T细胞IFN-γmRNA表达水平为实验组的2.37倍。实验组CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于对照组（85.4%vs70.9%）。结论：肺癌细胞可诱导CD4＋T细胞IFN-γ基因启动子发生高甲基化,进而导致IFN-γ基因表达下调,可能对肺癌患者的免疫抑制起重要作用。