抑制miR-181a对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y多巴胺能细胞损伤的保护作用

目的：通过抑制mi R-181a表达研究其对鱼藤酮诱导SH-SY5Y的细胞损伤、内质网应激以及未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）的影响,为mi R-181a在帕金森病治疗方面提供初步的实验依据。方法：不同浓度的鱼藤酮诱导SH-SY5Y作用12、24、48、72 h;mi R-181a类似物和mi R-181a抑制剂及0.4μmol/L鱼藤酮诱导SH-SY5Y作用24 h;采用CCK-8法检测细胞存活率;Annexin V/PI双染检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测mi R-181a与葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78 k D,GRP78）的靶标关系;q RT-PCR检测mi R-181a和GRP78 m RNA表达水平;Western Blot检测GRP78、肌醇需酶1α（inositol-requiring enzyme 1,IRE1α）、X-盒结合蛋白1（X box-binding protein 1,XBP1）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP）的蛋白表达水平。结果：（1）CCK-8结果显示：随着鱼藤酮浓度（〉0.1μmol/L）增加,SH-SY5Y存活率降低,并存在浓度和时间依赖性;其中0.4μmol/L作用24 h后存活率已降为0.6（P〈0.05）,加入mi R-181a抑制剂后细胞存活率升高达0.8（P〈0.05）;（2）Annexin V/PI双染结果显示：抑制mi R-181a表达,细胞的凋亡降低至0.23（P〈0.05）;（3）双荧光素酶报告基因检测显示：mi R-181a与GRP78存在直接的靶标关系;（4）q RT-PCR结果显示：0.4μmol/L鱼藤酮作用24 h后细胞mi R-181a呈高表达（P〈0.05）,抑制mi R-181a表达可上调GRP78 m RNA水平（P〈0.05）;（5）Western Blot结果显示：抑制mi R-181a表达可上调GRP78和下调p IRE1α、XBP1和CHOP的蛋白表达（P〈0.05）。结论：抑制mi R-181a表达可减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能通过上调GRP78进而调节内质网应激以及抑制UPR相关信号通路,从而发挥对神经元细胞的保护作用。