La ruta de la proteina Quinasa C en Saccharomyces cerevisiae. Conexiones con el control del ciclo celular.

espanolLa ruta de la Proteina quinasa C en Saccharomyces cerevisiae desempena funciones esenciales en el control de la integridad celular y ademas se ha sugerido que participa en la coordinacion entre el crecimiento y la division celular. En este trabajo se ha estudiado el mecanismo molecular de regulacion de la expresion genica mediada por la ruta PKC, tomando como modelo en gen FKS1 que codifica para la subunidad catalitica de la glucano sintasa. Se ha caracterizado que la secuencia minima responsable de la regulacion mediada por la ruta PKC en el gen FKS1 corresponde con una secuencia de union del factor Rlm1. Ademas se ha detectado union in vivo de Rlm1 al promotor del gen FKS1 y que dicha capacidad de union no esta regulada por la ruta PKC. Por otro lado, se ha detectado que la MAP quinasa Slt2 de la ruta PKC se une al DNA en la zona cercana al ATG del gen FKS1. Se detecto que la RNA polimerasa II se une tanto a la zona del ATG como al final del gen FKS1 con independencia de la funcion de la ruta PKC. Por otro lado, se ha observado una modificacion post-traduccional de la proteina Paf1 (miembro del complejo Paf1C) dependiente de Slt2, consistente con una posible fosforilacion de Paf1 por Slt2. Se observo que aunque la ruta no regula la capacidad de union in vivo al gen FKS1 de Paf1 en la zona del ATG si parece controlar el desplazamiento de Paf1 a lo largo del gen FKS1. En esta tesis se ha realizado un estudio de expresion global de un mutante pkc1-8 termosensible, dicho estudio ha permitido identificar 65 genes cuya expresion se modifica significativamente al inactivar la funcion Pkc1. En este mismo sentido se han identificado proteinas asociadas a Pkc1 y Slt2 mediante la utilizacion del metodo TAP de purificacion de proteinas. A destacar las proteinas Rpc34, Ssk22 y Apd1 que se detectaron asociadas a Pkc1. Y las proteinas Mot1, Sec31 y Kap123 asociadas a Slt2. Los estudios realizados han descubierto una relacion de la carioferina Kap123 con la ruta PKC. Kap123 podria participar en la ruta PKC importando al nucleo a alguna de las proteinas downstream de la ruta PKC. Se ha detectado tambien una relacion genica entre la ruta PKC y la ciclina Cln2, en la que la delecion del gen CLN2 suprime los defectos de crecimiento de los mutantes de la ruta PKC, posiblemente debido al retraso en el proceso de gemacion que supone la inactivacion de la ciclina Cln2. __________________________________________________________________________________________________ EnglishIn the yeast Saccharomyces cerevisiae, the PKC pathway main function is maintaining the cell integrity, moreover it has been said that partipates in coordination between division and cell growth. In this work, we have studied the molecular mecanism that controls gene expression by the PKC pathway using the FKS1 gene (glucan sintase gene) as a model. We have identified that the minimun sequence in FKS1 responsible of the regulation of transcription mediated by PKC pathway corresponds with a Rlm1 binding sequence. Rlm1 binds in vivo to the FKS1 promoter and this binding is not dependent on PKC pathway. In other hand, it has been detected that MAPK Slt2 is bind to the FKS1 promoter near to the ATG. We have also detected the RNA pol II subunit Rpb1 binds to the FKS1 promoter near to the ATG and in the end of the coding region independently of the PKC function. We have also observed a Slt2 dependent post translationally modification (consistent with a phosphorilation) of Paf1. Moreover, the PKC pathway seems to regulate the Paf1 movement right across the gene FKS1. A global expression study using DNA arrays in a pkc1 mutant allow us to identified 65 genes whose expression is modified by inactivating PKC function. In the same way, we have identified by TAP purification several proteins associated with Pkc1 and Slt2. It?s worth mentioning, Rpc34, Ssk22 and Apd1interacting with Pkc1. And Mot1, Sec31 and Kap123 interacting with Slt2. We have uncover a relationship between karyopherin Kap123 and the PKC pathway. We propose that Kap123 could participate in PKC pathway importing into the nucleus some of the proteins dowstream of Slt2. In other way, we have detect a genetic interaction between PKC pathway and cyclin Cln2, where deletion of CLN2 gene supress the growth defects associated to PKC pathway mutants, probably because of a delay in the budding process caused by inactivating Cln2.