On the isolation of immunostimulatory active acemannan from Aloe barbadensis

Se obtuvo el acemanano de Aloe barbadensis mediante cuatro procesos: 1) cromatografia de exclusion molecular (SEC) en matriz de sefarosa CL-4B, seguida de precipitacion etanolica; 2) SEC, ultrafiltracion en cartuchos de fibra hueca (30 kDa o 0.1 μm) y precipitacion etanolica; 3) SEC, precipitacion con bromuro de cetil trimetil amonio (CTAB) y precipitacion etanolica; y 4) precipitacion directa con CTAB, seguida de precipitacion etanolica. El CTAB fue efectivo para concentrar los eluatos cromatograficos (proceso 3) y permitio el aislamiento directo y la purificacion del acemanano a partir de extractos etanolicos crudos (proceso 4), sin recurrir a SEC. En el proceso 4 disminuyeron los tiempos de operacion del proceso (a 9 de 15 dias del proceso 3), y los costos por materias primas. Ambos procesos generaron acemanano libre de niveles detectables de antraquinonas y ADN contaminante, con niveles de proteina inferiores al 5% del peso seco. El preparado estuvo compuesto fundamentalmente de manosa, 97% en los procesos 1 al 3, y 75% en el proceso 4, con masas moleculares en el rango de 2000-5000 Mr, segun SEC en G5000 PW. El acemanano en su formulacion seca se esterilizo mediante radiacion gamma a la dosis optima de 10 kGy y retuvo sus propiedades fisico-quimicas y su capacidad adyuvante, demostrada esta ultima mediante coadministracion con el HBsAg por via nasal en ratones. La mezcla acemanano-benzil alcohol 1% (p/v) no afecto la capacidad adyuvante. El contenido de carbohidratos totales, las propiedades organolepticas y el perfil SEC-HPLC, el pH y el limite microbiano se mantuvieron estables por al menos 6 meses de almacenamiento a -20 °C. Estos resultados pueden ser utiles para el diseno de procesos de produccion de acemanano con calidad farmaceutica para estudios clinicos