CR2-DAF和DAF-CR2靶向补体抑制物的构建、表达与鉴定

目的:构建针对补体激活物的特异靶向补体抑制物,并对其进行体外活性鉴定。方法:将补体受体(CR2)与补体抑制物(促衰变因子,DAF)以融合表达方式(顺反结构)克隆到表达载体PBM中,然后将重组体转移到CHO细胞中进行蛋白表达,用SDS-PAGE、Western blot、流式细胞术(FCM)检测、SPR检测及补体介导的细胞溶解实验对表达的融合蛋白进行生物学活性鉴定。结果:SDS-PAGE和Western blot结果显示出现预期大小的目标片段。FCM与SPR检测结果显示,重组蛋白CR2-DAF与DAF-CR2能特异地与C3包被的CHO细胞、C3dg配基相结合。补体介导的细胞溶解实验结果显示,靶向补体抑制物比相应的非靶向补体抑制物的抑制效果明显(CR2-DAF的抑制效率高达20倍)。结论:成功构建了CR2-DAF和DAF-CR2靶向补体抑制物,为下一步进行动物体内补体抑制实验奠定了基础。