Regulación de los canales nav1.5 y kv1.5. Papel de las quinasas y de las subunidades beta

En la presente Tesis Doctoral se han analizado los efectos de distintas quinasas o procesos fisiologicos (proliferacion y diferenciacion) sobre la expresion y funcion de canales ionicos y subunidades accesorias, y se ha identificado el complejo de se nalizacion del canal Kv1.5. Para ello, se han utilizado dos lineas celulares diferentes: a) para el estudio de la regulacion por quinasas de la interaccion de los canales Kv1.5 con las subunidades Kvbeta1.3, celulas HEK293 y b) para el estudio de la regulacion de los canales de sodio durante la diferenciacion y la proliferacion, mioblastos de rata L6E9. Se han utilizado tecnicas de electrofisiologia (configuracion de celula entera de la tecnica de fijacion de voltaje en parches de membrana) y te cnicas de biologia molecular. Los resultados del primer bloque demuestran que la activacion de la proteina quinasa C (PKC) no es necesaria para que se produzca el ensamblaje del canal Kv1.5 con la subunidad Kvbeta1.3. Ademas, se identifica un complej o proteico funcional o ?canalosoma? formado por: Kv1.5, Kvbeta1.3, la proteina de anclaje de las PKC activadas o RACK1, y la PKCbetaII. Los resultados obtenidos en el segundo bloque demuestran que los mioblastos obtenidos en una fase temprana de dife renciacion adoptan un fenotipo cardiaco y que la expresion de los canales Nav1.5 subyace como mecanismo molecular responsable de dicho proceso. Ademas, durante la diferenciacion de estas celulas se produce un aumento en la expresion de las subunidade s Navbeta1-3, mientras que el patron de expresion de la subunidad Navbeta4 no se modifica.