二十碳五烯酸对 E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的影响

目的探讨二十碳五烯酸（EPA）对黏附侵袭性大肠杆菌（AIEC）LF82感染后肠上皮细胞（Caco-2）紧密连接蛋白（ZO-1）表达的影响。 方法用Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞紧密连接模型，分为EPA处理组，EPA 0、25、50、100、200 μmol/L干预96 h；以及EPA（EPA 0、25、50、100、200 μmol/L）+ E.coli LF82联合处理组，在不同浓度EPA干预96 h的基础上，予 E.coli LF82分别干预0 h、6 h、12 h。通过细胞形态学观察，MTT法测定细胞生长曲线，以及细胞膜两侧碱性磷酸酶（ALP）活性检测对Caco-2细胞模型进行评价。流式细胞术检测不同浓度EPA对Caco-2细胞凋亡的影响。RT-qPCR检测EPA和/或 E.coli LF82作用于Caco-2细胞后ZO-1 mRNA的表达情况。酶联免疫吸附法检测Caco-2细胞上清中TNF-α的变化。 结果EPA25、50 μmol/L处理后，Caco-2细胞存活率均高于0浓度组，且增高呈浓度依赖性（ P P P E.coli LF82干预Caco-2细胞6 h、12 h后，ZO-1 mRNA表达随处理时间延长而减少，均低于未处理组（ P E.coli LF82处理6 h或12 h，Caco-2细胞的ZO-1 mRNA表达随EPA浓度增加而增加，均高于 E.coli LF82单独处理组（ P E.coli LF82处理6 h、12 h组的TNF-α分泌随干预时间延长而增加，均高于未处理组（ P P < 0.05）。 结论EPA能有效预防 E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接的破坏，抑制炎症因子的分泌，对肠黏膜屏障有一定的保护作用。