TOXICIDADE DO AGROQUÍMICO MANCOZEB NO DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO DE PEIXE ZEBRA

Ditiocarbamatos (DTCs) sao uma classe de defensivos agricolas de amplo espectro utilizados em diversas culturas. Dentre esses compostos, o Mancozeb (MZ), utilizado como fungicida, apresenta baixa toxicidade aguda e pouca persistencia ambiental, no entanto, seus produtos de degradacao como etilenotiureia tem demonstrado embriotoxicidade e teratogenicidade em organismos nao-alvo. Recentemente, peixes como Danio rerio, tambem conhecido por zebrafish tem surgido como modelo experimental em diversos campos de pesquisa, devido a diversas vantagens como prole numerosa e desenvolvimento rapido e externo. Este modelo tem sido utilizado para caracterizacao de efeitos teratogenicos mediados por DTCs na fase embrio-larval. Dentre os efeitos causados pela exposicao a DTCs podemos citar anormalidades morfologicas como distorcoes na notocorda, edema de pericardio e diminuicao do comprimento corporal. Um dos mecanismos sugeridos para essas anomalias envolve estresse oxidativo na formacao de dano morfologico. Neste contexto, decidimos investigar o envolvimento do estresse oxidativo na embriotoxicidade induzida por Mancozeb, juntamente com a utilizacao do antioxidante N-acetilcisteina (NAC). Os embrioes utilizados nos testes foram obtidos atraves de acasalamento padrao em bioterio. Embrioes de 3-4 horas pos-fertilizacao (hpf) foram pre-expostos ao antioxidante N-acetilcisteina (NAC) na concentracao de 750μM durante o periodo de 1h, apos, os embrioes foram expostos a solucoes de Mancozeb 96% com diferentes concentracoes: (0,5mg/L, 0,75mg/L e 1,0mg/L), alem do grupo controle onde foi adicionado apenas agua do sistema (zebtec) em placas de 24 pocos (5 embrioes por poco em um volume final de 1mL). Foram feitas observacoes diarias, bem como obtidas imagens atraves de lupa estereoscopica Carl Zeiss com câmera acoplada Moticam 2000, para o acompanhamento e desenvolvimento embrio-larval, alem disso, foram avaliadas a taxa de mortalidade e numero de embrioes eclodidos ao final do tratamento. Para a analise de deteccao de especies reativas de oxigenio (EROS) foi utilizado o corante fluorescente de 2,7-diacetato de diclorofluoresceina (DCF-DA) in vivo. Em nossos resultados observamos que nao houve aumento de mortalidade nos grupos tratados em comparacao com CTL. No entanto, nas analises morfologicas foi possivel observar que 100% dos embrioes tratados com solucoes de MZ apresentaram anomalias, que se mostraram mais severas de modo dose-dependente no intervalo de tempo de 96h. Juntamente com os efeitos teratogenicos foi possivel observar elevacao nos niveis de EROS. Embrioes pre-tratados com NAC, apresentaram uma significativa atenuacao dos danos morfologicos, bem como diminuicao dos niveis de EROS. Atraves dos dados obtidos com DCF-DA e analise morfologica, se torna possivel inferir que o composto Mancozeb interfere no balanco redox celular e embriogenese do modelo, essa hipotese pode ser reforcada com os resultados apresentados no pre-tratamento com NAC+MZ, onde foi demonstrado uma reversao nos danos morfologicos e uma diminuicao na formacao de especies reativas de oxigenio. Nossos estudos demonstram pela primeira vez efeitos teratogenicos do fungicida MZ sobre o desenvolvimento embrionario de peixe-zebra. A concomitante elevacao nos niveis de EROS com anormalidades no desenvolvimento embrionario e a eficiencia do pre-tratamento com um potente antioxidante, demonstra o MZ como um potencial agente pro-oxidante.